Anxiolytické Účinky Éterický Olej z Bergamotu Jsou Necitlivé na Flumazenilu u Potkanů

Abstrakt

Úzkostné poruchy jsou jedním z nejčastějších duševních poruch, a benzodiazepiny (BDZs), působící na gama-aminomáselné kyseliny typu A (GABA-A) receptor komplex, představují nejběžnější léky proti úzkosti ve světě. Chronické použití BDZ však vyvolává několik nežádoucích účinků. Údajně je aromaterapie bezpečnější pro zvládání úzkosti., Bergamot esenciální olej (BEO) extrahovaný z citrusových plodů bergamia Risso et poiteau, stejně jako jiné esenciální oleje, je široce používán v aromaterapii ke zmírnění příznaků úzkosti vyvolané stresem. Je zajímavé, že Předklinické údaje naznačují, že BEO indukuje anxiolytické / relaxační účinky v úkolech chování zvířat, které nejsou superponovatelné na úkoly benzodiazepinového diazepamu. Pro lepší objasnění zapojení Gabaergní přenos, tato studie zkoumá účinky předčištění s flumazenilu (FLZ), benzodiazepiny stránky protivníka, na BEO efekty pomocí open-pole úkolu (OFT) u potkanů., Získané údaje ukazují, že FLZ významně neovlivňuje behaviorální účinky fytokomplexu. Tyto výsledky ukazují na nedostatek překrývání mezi BEO a BDZ behaviorální účinky, které přispívají k charakterizaci neurobiologický profil esenciálního oleje pro jeho racionální využití v aromaterapii.

1. Úvod

několik esenciálních olejů extrahovaných z ovoce patřící do rodu citrusů se používá v aromaterapii k léčbě úzkosti, spánku, nálady a kognitivních poruch . Předpokládá se, že bergamot pochází z citrusů aurantium L. a Citrus limon L., nebo citrusové aurantifolia houpačka . Éterický olej z bergamotu (BEO) se získává lisováním za studena z obalová a, částečně, mezokarp čerstvé ovoce Citrus bergamia Risso et Poiteau, podle italských Lékopis XII ed. BEO obsahuje těkavé frakce (93-96% z celkového počtu) obsahující oxidované deriváty (např. linalool) a seskviterpenové a monoterpene uhlovodíků (např. limonen) a netěkavé frakce (4-7% z celkového počtu) obsahující polymethoxylated flavony, vosky, kumariny, a psoraleny jako bergamottin (5-geranyloxypsoralen) a bergapten (5-methoxypsoralen) ., Limonen, γ-terpinen a β-pinen, spolu s linalool, linalyl acetát patří mezi nejhojnější sloučeniny nalezené v těkavé frakce a všechny společně tvoří >90% celá oleje . V posledním desetiletí preklinické studie podporovaly terapeutické použití BEO. Zvláště, bergamotový olej je obdařen pozoruhodnou neurobiologické účinky, částečně vyplývající z rušení základní mechanismy jemně ladění synaptické plasticity za fyziologických a patologických podmínek, tj.,, mozková ischémie , bolest a behaviorální a psychologické příznaky demence . V bazálním stavu Beo zvyšuje extracelulární hladiny diskrétních aminokyselin s funkcí neurotransmiteru po systémovém nebo fokálním podání v hipokampu volně se pohybujících potkanů . Navíc systémové dávky BEO zvyšují elektrokortikografický korelát výstrahy, bdění a relaxace ., Kapacita BEO upravit EEG frekvence, související s upozornění a relaxace, podporuje data ukazují, anxiolytika-relaxační účinky po systémová nebo inhalační podání tohoto phytocomplex chování zvířat úkolů. Zajímavé je, že jsou získány kontroverzní výsledky porovnávající účinky BEO s účinky diazepamu (DZP). Ve skutečnosti, zatímco Saiyudthong a Marsden spekulovat, že aktivní složky phytocomplex komunikovat s BDZ místo na GABA-A receptorový komplex navozující anxiolytické účinky , nedávno jsme demonstrovali vlastnosti BEO nepřekrývají s účinky DZP ., Od Gabaergní přenos hraje klíčovou roli v patofyziologii úzkostné poruchy, získat větší vhled týkající se mechanismu účastní anxiolytické účinky z BEO, cílem této studie je prozkoumat účinky flumazenilu, antagonisty na BDZ vazebné místo, na chování vyvolané BEO v open-field test (OFT) u potkanů.

2. Materiály a metody

2.1., Zvířata

Samec Wistar potkanů (250-300 g; Charles River, Calco, Itálie) byly umístěny ve skupinách po čtyřech standardních laboratorních klecích (40 × 25 × 15 cm) při konstantní teplotě (22 ± 1°C) a relativní vlhkosti (50%) v rámci pravidelného světlo-tma plán (světla na 7 hodin do 7 hodin). Před pokusem OFT byly potkanům povoleny jeden týden adaptace na laboratorní podmínky s volným přístupem k potravě a vodě. Směrnice Rady Evropského společenství ze dne 24. listopadu 1986 (86/609 / EHS) a 4.března 2014 č., 26 bylo sledováno, aby se minimalizoval počet použitých zvířat, která stále generují spolehlivé výsledky.

2.2. Materiály

2.3. Experimentální postup

aklimatizace potkanů byla provedena po dobu 2 hodin v den experimentu. Zvířata byla vystavena návyku. Byly vytvořeny náhodné experimentální skupiny. Krysy podstoupily intraperitoneální (tj.) podávání BEO (500 µL / kg) nebo jojobového oleje . I. p. FLZ (3 mg/kg), návrat BDZ účinky v OFT , nebo jeho vozidla (tweenu ve fyziologickém roztoku) byl podáván jako předčištění 15 minut dříve., Po třiceti minutách byly behaviorální účinky vyhodnoceny pomocí testu OF . Tento experimentální protokol je v souladu s údaji z literatury, kde předběžná léčba FLZ vrací behaviorální účinky různých přírodních produktů často u hlodavců .

krysa byla pozorována z obrazovky v blízké laboratoři, protože test byl zaznamenán pomocí kamery s uzavřeným obvodem. Behaviorální testy byly provedeny mezi 09.00 a 13.00 hod. podle cirkadiánních rytmů. Videozáznamy byly podrobeny následující vyšetření zaslepená (neví ošetření) pozorovatele., Předávkování isofluranem bylo použito k eutanizaci zvířete po experimentu. Místnost byla větrána a aréna byla po denních sezeních omyta vodou a vyčištěna 70% etanolem, aby se zabránilo zbývajícím pachovým stopám BEO a exkrementů.

2.4., Open-Field Test

open-field test je považován za indikátor emocionální stav zvířete, který umožňuje snadné a poměrně rychlé hodnocení dobře definované chování, jako je křížení, zdi chovu, péče, centra, a nehybnosti, a to je široce používán při screeningu drog, které působí na centrální nervový systém (CNS) . Zejména, křížení a chov stěn může být, příslušně, považován za ukazatele pohybové aktivity a průzkumného chování, zatímco péče, centrum, a nehybnost jsou chování pozitivně korelované se strachem nebo emocionalitou ., Krysa byla umístěna ve středu tmavé plastové kruhové arény (průměr 75 cm) v zvukotěsné místnosti s 20 Lux světlem . Doba trvání každé behaviorální relace byla 20 min. Vyhodnocené parametry (obecné pohybové aktivity v intervalu 5 min (náměstí hranice přechodů s oběma předními tlapami a zdi chovu), úzkost týkající se chování (obličej a tělo, péče, mytí hlavy, a času stráveného ve středu arény), a nehybnosti), byly nahrávány a analyzovány, aby bylo zaznamenal (Labehaviour).

2.5., Statistiky

Statistické analýzy se skládala z jedné-způsob, nebo two-way ANOVA následovaná Tukey multiple srovnání test pomocí Graph Pad® 6.0. hodnota < 0.05 byla považována za statisticky významnou.

3. Výsledky

obousměrná ANOVA analýza ukazuje rozdíly mezi léčbou a časem, pokud jde o frekvence křížení a chovu stěn (Tabulka 1). Zejména podávání BEO snižuje obě chování dosahující statistické významnosti ve srovnání se skupinou CTR (Obrázek 1)., Systémové podávání FLZ, 15 min před BEO, nemění snížení frekvencí křížení a chovu stěn měřených u potkanů ošetřených esenciálním olejem (Obrázek 1).

jednosměrná ANOVA analýza také naznačuje rozdíly v čase péče, středu a nehybnosti (Tabulka 2). U zvířat léčených skupinou BEO versus CTR je pozorován statisticky významný pokles. Předúprava s FLZ není schopna tomuto účinku zabránit (Obrázek 2).,

pokud jde o období uprostřed arény, výsledky naznačují, že systémové podávání BEO snižuje toto chování dosahující statistické významnosti ve srovnání se skupinou CTR (Obrázek 2). Předběžná léčba FLZ neovlivňuje tento účinek BEO, i když se ukazuje mírný trend () směrem ke zvýšení času stráveného ve středu (Obrázek 2).

Kromě toho, ošetřených zvířat s BEO, i když stále bdělé, tráví více času v nehybnosti ve srovnání s kontrolní skupinou (Obrázek 3)., Je zajímavé, že u zvířat předem ošetřených FLZ je pozorován trend ke snížení nehybnosti pozorovaný ve skupině BEO, i když se nepočítá žádný statistický rozdíl () (obrázek 3).

Pro všechny parametry studoval, předčištění s FLZ v kontrolní skupině nemá vliv na chování zvířat v OFT podpůrné literatury dat pomocí široké dávkové rozmezí 0,1–10 mg/kg .

4., Diskuse

BEO, stejně jako ostatní esenciálních olejů, je široce používán v aromaterapii, aby se minimalizovalo příznaky vyvolané stresem, úzkosti, i když základní mechanismus a jeho rušení na Gabaergní přenos nadále být objasněn .

podávání přípravku BEO má anxiolytické účinky, které často významně neovlivňují FLZ, antagonista místa BDZ. Poslední zjištění potvrzují, že vlastnosti BEO nejsou paralelní s vlastnostmi BDZs ., Zde jsme pozorovali, že pohybovou aktivitu a explorativní chování, měřeno přes a zdi chovu frekvence, jsou sníženy u léčených zvířat s BEO ve srovnání se skupinou s vehikulem a předčištění s FLZ nepodařilo, aby se zabránilo účinky phytocomplex. Kromě toho se v 20minutové relaci často měří snížení chování péče BEO, které není ovlivněno předběžnou léčbou FLZ. Celkově tyto výsledky naznačují, že BDZ receptor není zapojen do těchto účinků BEO., Předčištění s FLZ částečně zabraňuje účinky na BEO nehybnosti a času stráveného ve středu arény, tj. chování pozitivně koreluje se strachem nebo emocionality, i když to nedosáhlo statistické významnosti. Zajímavé je, že tento by podporoval zapojení receptoru GABA-A do účinků BEO na toto chování. GABA-A receptor obsahuje isosteric stránky pro endogenní ligand a několik různých allosterických vazebných míst, které modulují aktivitu na receptor nepřímo a jsou terčem různých syntetických a přírodních látek ., Molekuly s různými chemickými strukturami a afinitami ovlivňují vazebné místo a vykazují odlišné farmakologické účinky. Zejména několik farmakologických účinků lze připsat modulaci specifických alfa podjednotek . Například sedativní a hypnotické vlastnosti jsou zprostředkovány receptory GABA-a obsahujícími podjednotky alfa-1, zatímco pozitivní modulace receptorů GABA-a na podjednotkách alfa-2 a/nebo alfa-3 vykazuje anxiolytické účinky .,

zajímavé je, že jsme dříve prokázali, že systémové podávání BEO vyvolává mírné uvolňování GABA v hippocampu volně se pohybujících krys . Tyto neurochemické nalezení, spolu s účinky FLZ na nehybnost a centrum zde uvedena, by mohla podpořit hypotézu, že některé látky přítomné v phytocomplex může interferovat s GABA-receptory zprostředkované převodovka. Několik studií zkoumalo zapojení této neurotransmise do anxiolytických účinků jednotlivých těkavých sloučenin přítomných v éterických olejích, jako je BEO., Autoři zejména naznačují, že způsob podávání sloučenin by mohl modulovat jejich působení na místě BDZ ovlivňující anxiolytické účinky. Například linalool, podávaný inhalací, vyvolává anxiolytické účinky, kterým FLZ brání, zatímco systémové podávání nevyvolává anxiolytické účinky . Kromě toho, systémové podání směsi cis-a trans – (+)- limonen epoxidovou vyvolává anxiolytické účinky, které se bránily tím, předčištění s FLZ . Pokud je však (R)-(+)-limonen podáván inhalací, anxiolytický účinek není blokován antagonistou místa BDZ .,

jiné neurotransmiterové systémy byly zapojeny do anxiolytických účinků vyvolaných esenciálními oleji. Například myši vystavené inhalaci citronového oleje představují antistresový účinek modulací dopaminergní, serotonergní a GABAergní neurotransmise . Inhalace levandulového esenciálního oleje vykazuje anxiolytické účinky zvyšující hladinu serotoninu (5-HT) v prefrontální kůře, striatu a hippocampu ., Navíc, WAY100635, 5-HT receptorů, blokuje účinek esenciální olej z levandule při použití antagonistů GABA-A receptor postrádá efekt . Podobné údaje jsou také dosaženy Galdino et al. a Tabari et al. kteří pozorovali anxiolytické účinky po systémové injekci Spiranthera odoratissima a Růže pelargónie esenciální oleje působit předčištění s 5-HT1A receptorů, ale není to tím, že FLZ .,

Celkově tyto údaje podporují hypotézu, že anxiolytické účinky éterických olejů a pravděpodobně z BEO může být zdůrazněno tím více složité mechanismy, které si zaslouží další šetření.

5. Závěr

BDZs jsou dobře vyvinuté a běžně předepisované léky používané k léčbě úzkostných poruch; nicméně, některé nežádoucí účinky (např., letargie, závratě, ospalost, sedace a závislost) může být těžké, takže se vývoj nových léků je nutné., Tyto nežádoucí účinky vedly šíření aromaterapie, i když jsou k dispozici omezené údaje o mechanizmy anxiolytickou aktivitu esenciálních olejů. Výsledky naší studie přispívají k prohloubení charakterizace neurofarmakologického profilu BEO. Ta podporují hypotézu, že anxiolytické účinky tohoto phytocomplex nejsou srovnatelnou s těmi BDZs a jeho aromaterapeutické použití pro léčbu stresu, vyvolané úzkostí.,

dostupnost dat

údaje použité k podpoře zjištění této studie jsou na vyžádání k dispozici od příslušného autora.

Střet Zájmů

autoři prohlašují, že neexistují žádné střety zájmů týkající se zveřejnění této práce.

autoři děkují Guido Fico za zručnou technickou podporu. Tato práce byla podpořena University of Calabria “ ex kvóta 60%.”

---