Dolly v 20: Vnitřní příběh na světě nejslavnější ovce

Dolly, první klonovaný savec z dospělé buňky, se narodil 5. července 1996. Ale byla vytvořena o pět měsíců dříve, v malé místnosti v Roslin Institute, mimo Edinburgh, Spojené království.

Karen Walker, embryolog, PPL Therapeutics: v den, kdy jsme vyrobili Dolly, jsme měli takový nesmyslný den.,

Bill Ritchie, embryolog, Roslin Institute: bylo to 8 Únor 1996. Vyhledal jsem si to. Víme, že to byl nesmyslný den: Měli jsme různé problémy s infekcemi a věcmi.

Walker: je škoda, že budova byla zbořena, jinak byste mohli vidět místnost, ve které byla Dolly vyrobena. Používám slovo“ pokoj “ volně, protože to byla opravdu jen velká skříň, která, když jsme tam s Billem byli, mohli jste jen dostat dvě židle a inkubátor.

Ritchie: doslova to byla skříň. Byla to skladovací skříň na konci laboratoře., Když jsme se dostali kamery posádky později, nemohli uvěřit, že to, nebylo místo pro natáčení.

Walker a Ritchie byly součástí projektu v Roslin Institute a spin-off PPL Therapeutics, jejichž cílem je přesné genetické změny hospodářských zvířat., Vědecký tým, vedený Roslinová embryolog Ian Wilmut, usoudil, že nejlepší způsob, jak učinit tyto změny by bylo vyladit genomu buňky v kultuře, a pak přenos jádra do nové buňky.

Ritchie: jednoduchý způsob popisu jaderného přenosu je, že vezmete oocyt, neoplodněné vejce a odstraníte chromozomy. Pak si vezměte kompletní buňku, která obsahuje mužské i ženské chromozomy-všechny naše buňky dělají, kromě gonád., Vezmete mobil a pojistkou do jádra vajíčka, aktivujte ji — která začíná to roste — a přenést je do náhradní matky. Doufejme, že se zkříženými prsty, dostanete klonované potomstvo, kopie zvířete jste vzali tu buňku z.

Walker: únavné je absolutně slovo. Sedíte, díváte se pod mikroskop a máte obě ruce na mikromanipulátory. Je to něco jako joysticky děti používají v dnešní době na hry. Pokud vám loket uklouzl,můžete celou misku vytřít.,

O rok dříve, tým produkoval twin ovce, jménem Megan a Morag, klonováním kultivované embryonální buňky ve snaze čele Roslinová vývojový biolog Keith Campbell. V tento den v únoru 1996 však problémy s buněčnými liniemi plodu, které plánovali použít, znamenaly, že budou potřebovat dalšího jaderného dárce.

Walker: moje paměť je mávat jako kuře a přemýšlet: „co do toho vložíme?“protože buňky, které jsme chtěli použít, tam nejsou. Poslední věc, kterou chcete udělat, je plýtvat těmi oocyty, které máte. Chtěli jsme alespoň něco zkusit.,

Angela Scott, cell-culture technician, PPL: Dostal jsem zprávu od Karen, že buňky, které očekávali, byly kontaminovány. Zeptali se mě, jestli mám nějaké buňky, které by mohly použít. Buňky, které jsem měl, byly epiteliální buňky ovčí mléčné žlázy: chtěli jsme zvýšit expresi bílkovin v mléce. Jednalo se o dospělé buňky.

Alan Colman, ředitel výzkumu, PPL: přišel jsem z pozadí jaderného přenosu s Johnem Gurdonem . Nikdy nebyl schopen získat dospělou žábu pomocí jaderného přenosu od dospělého dárce buněk., Byl schopen získat pulce pomocí dospělých buněk, ale nikdy nebyl schopen získat dospělé žáby. Nemyslel jsem si, že to bude fungovat s dospělými buňkami vůbec. Ale neměli jsme žádnou jinou buněčnou linii jít s, takže jsme se všichni shodli, že bychom používat tyto buňky mléčné žlázy a jen vidět, co se stalo, získat nějaké zkušenosti. Ty byly od 6leté Ovce středního věku pro ovce.

Ian Wilmut, embryolog, Roslin: to je něco, co se dodnes mýlí. Dolly je popisován jako první savec klonovaný z dospělé buňky. Ona je vlastně první dospělý klon, období. Ona je často undersold.,

ačkoli klonované a transgenní krávy by byly pro průmysl cennější, tým Roslin pracoval s ovcemi z praktických důvodů.

Wilmut: dobytek je neuvěřitelně drahý a má dlouhý generační interval. Ovce jsou mnohem levnější a mnohem snazší pracovat. A znali jsme reprodukční biologii. Bylo velmi pravděpodobné, že pokud bychom mohli něco udělat v ovcích, fungovalo by to u krav. Ovce jsou malé, levné krávy.

John Bracken, asistent pro výzkum farmy, Roslin: během období rozmnožování by každý týden prošlo operací 40-60 zvířat., Je to spousta různých ovcí v systému, a to muselo být velmi přesně sledovat, takže zvířata byla na správném místě ve správný čas.

Walker: Bill držel embrya a oocyty — když je přivedl zpět z farmy-v kapse na horní košili. Neměl jsem horní košili kapsu, tak jsem je zastrčit do podprsenky. Byl to způsob, jak je udržet v teple a přivést je zpět do laboratoře a dostat je do řádně kontrolovaného prostředí. Nemyslím si, že uvnitř mé podprsenky byl strašně řízen, ale ani byl Bill ‚ s top košile kapsa.,

Ritchie: v den, kdy jsme udělali Dolly, udělal bych enukleaci a ona by provedla fúzi. To byl náš normální způsob, jak dělat věci.

Walker: udělal jsem fúzi v den, kdy jsme udělali Dolly. Bill a já vtip, že on je máma a já jsem táta, protože, v podstatě, byl jsem napodobit, co by spermie dělat.

Jsou převedeny 277 jádra z prsní buněčné linie — od bílých tváří plemeno známé jako Finn Dorset — do vejce od hardy Skotský blackface plemeno. Pouze 29 výsledných embryí bylo implantováno do náhradních bahnic. Očekávání byla nízká: zdálo se téměř nemožné, aby jádro dospělých buněk mohlo být přeprogramováno, aby vzniklo živé zvíře. Většina klonovaných embryí byla přerušena, mnoho ještě před těhotenstvím mohlo být určeno ultrazvukem.

Wilmut: období chovu ovcí začíná v říjnu a končí v únoru, březen-ish., Do Vánoc jsme zavedli těhotenství po přenosu z plodových buněk, takže to šlo dobře. Kdybychom to neudělali, pravděpodobně bychom nehráli na práci s tím, co se stalo Dolly, mléčné buňky.

Angelika Schnieke, molekulární biolog, PPL: vzpomínám si na setkání s Ianem Wilmutem v jídelně a byl velmi skeptický. Řekl: „Byl bych překvapen, kdyby to funguje, ale PPL platí za experimenty, takže jsme dělat je.“

Bracken: naskenovali jsme všechny příjemce, kteří měli přenesená embrya, a věděli jsme, že jsou důležitými ovcemi., Každý den, kdy vědci věděli, že skenujeme, by velmi rádi věděli, zda existují nějaké těhotenství.

Walker: nechtěl jsem jít dolů sledovat všechny skenování. Ale s Dolly-protože jsme věděli, že to jsou buňky, které jsme Bill a já vložili – jsem šel v ten konkrétní den s Johnem.

Bracken: byl jsem opravdu rád, že to bylo těhotenství. Neuvědomil jsem si skutečný význam toho, protože jsme nebyli opravdu řekl. Jen jsme věděli, že je to důležité těhotenství. Neměla stejnou váhu. Nemysleli jsme si, “ Páni!, Pokud to postupuje do živého beránka, to bude světový šlehač, nebo to bude zase vědecké porozumění na hlavě.“

Walker: vzal jsem si se mnou prázdné video, abych mohl ukázat svým kolegům. To video sedí v mém podkroví a k mé hanbě jsem ho ještě nikdy nepřenesl na DVD. Měl bych.

Schnieke: vzpomínám si na den, kdy jsme měli první skenování. Vždycky jsme se ptali. A pak jsme viděli obrázek a skeny. Pak musíte jen doufat, že to trvá a jde celou cestu.,

Wilmut: Moje paměť je dívali se kolem 30. den nebo 35, tak tam“s dalších 120 dní , kde budete mít na povzdechl si s úlevou a doufala.

jen několik členů týmu bylo svědkem jejího narození.

Bracken: stalo se to kolem 4:30 odpoledne. Hned, jak začala rodit, zavolali jsme veterináři, aby jednoho z jejich veterinářů dostali ven., I když Douglas McGavin a já pravděpodobně měl 50 let zkušeností mezi námi, to prostě by bylo neslýchané, kdybychom se rozhodli, že budeme pomáhat narození a něco se pokazilo.

Ritchie: věděli Jsme, že Dolly byla, co se narodí, a myslím, že byla vykazuje známky blíží porodem, a hle jsem prošel, a tam byly kousky Dolly narodila. Byla tam veterinářka, tak se ujistila, že zvíře je v pořádku a Beránka vytáhla ven.

Bracken: bylo to naprosto normální. Žádné komplikace. Byla to velmi životaschopná beránka., Postavila se na nohy velmi rychle, pravděpodobně během první půl hodiny, což je opravdu dobrý náznak, že věci jsou normální.

Ritchie: myslím, že jsem skákal nahoru a dolů, když jsem viděl ten bílý obličej.

Scott: Karen byla v té době pryč na svatbě.

Walker: dal jsem jí faxové číslo hotelu. Kéž bych si nechal ten fax. Bylo tam napsáno: „má bílou tvář a chlupaté nohy.“

Scott: nevím, co si museli myslet v hotelu:“Páni, to je opravdu neobvyklé dítě.“

Wilmut: byl jsem v přidělení. Volal mi, že máme živého beránka., Vydal jsem pokyn, že nikdo by tam neměl být, kdo tam nemusí být. Spousta lidí byla zvědavá. Poslouchal jsem své vlastní pravidlo, protože nemám co přispět.

Bracken: stojím vedle Douglase Mcgavina a dívám se, jak veterinář pomáhá tomuto porodu, a udělal jsem Douglasovi poznámku mimo manžetu. Řekl jsem: „Víš, jak tomu Beránkovi budeme říkat? Budeme to muset říkat Dolly“, po Dolly Parton, protože buňky jsou odvozeny z mléčné tkáně.

Wilmut: být poněkud puritánský, mohl jsem být trochu znepokojen. Při zpětném pohledu to bezpochyby bylo skvělé jméno.,

Bracken: Toto je slyšení. Nikdy mi to přímo neřekli. Ale slyšel jsem, že kontaktovali Dolly Parton a řekl: „máme tento klonovaný ovce, která je pojmenována po vás.“

Wilmut: nevím, jak zpráva prošla, ale bylo nám řečeno, její agent řekl: „nebylo nic takového jako baaad publicity.“Nevím, jestli je to pravda.

během několika příštích měsíců Wilmutův tým potvrdil, že Dolly je klon mléčné buněčné linie a napsal výsledky. Její narození mělo být přísně tajné, až do vydání Nature paper popisujícího experiment v únoru 1997 (I., Wilmut et al. Nature 385, 810-813; 1997).

Harry Griffin, vědecký ředitel, Roslinová: Dva nebo tři měsíce před zveřejněním papír, musím o tom vědět. Pokud jde o přípravu, jednalo se o PPL. Viděli to jako příležitost získat publicitu pro sebe. De Facto jsme spolupracovali s jejich PR firmou. Docela jsme se připravili.,

Wilmut: Ron James, kdo byl generální ředitel PPL therapeutics, a já jsem byl citován jako hlavní mluvčí a vzhledem k tomu, trochu školení o ex-lidé z BBC, kteří v první řadě přišel a poměrně agresivně uvízl mikrofony naše nosy, a zeptal se agresivní otázky, a následně udělal to velmi jemně. Nebyli jsme se přiblížil kdekoliv v blízkosti agresivní způsob, jakým se snažili první, což bylo docela šokující. Jsem si jistý, že to stálo za to mít.

Griffin: měli jsme všechno organizované., Hovory by být zaměřena na De Facto a oni jen chtěli zkusit a uspořádat nějakou soudržnost v naší reakci ve smyslu, kdo má přednost a kdo nechtěl“t. Toto vše by mělo vyvrcholit, doufali jsme, na čtvrtek, že vyšel ten článek. Co to bylo 27. února? Je zřejmé, že to nebylo.

Wilmut: Robin McKie na Observer unikl. Obvinění popře.

Robin McKie, science and technology editor, The Observer, Londýn: neviděl jsem, že věci v přírodě. Nedivím se mu, že je naštvaný, ale šel jsem do velké bolesti, aby se zabránilo věci, které by mě dostat být obviněn z toho., Pomohl jsem pár chlapům, kteří dělali televizní program o genetice, a oni řekli, „Ach, mimochodem, klonovali ovci v Edinburghu.“Nevěřil jsem jim, ale zavolal jsem pár lidí v terénu, a jeden z nich v Americe to potvrdil. Ale byl jsem velmi, velmi znepokojen. Říkal jsem něco docela senzačního, s absolutně žádným papírovým důkazem toho, co se dělo. Řekl jsem svému zástupci redaktorovi všechno, co jsem věděl, a donutil mě to napsat. Pak to zasáhlo ventilátor.,

Griffin: Ian mi zavolal a řekl, že byl právě povolán a řekl, že pozorovatel se chystá spustit příběh v neděli před zveřejněním v Nature.

Ian a já jsme šli do ústavu asi v 9 hodin ráno v neděli, aniž bychom věděli,zda se lidé mohou dostat. Telefon zazvonil nepřetržitě. Měli jsme bizarní situaci, kdy začal zvonit telefon v čisticí skříni. Když jsem na to odpověděl, bylo to, myslím, Daily Mirror, kdo nějak dostal toto konkrétní spojení. Kolem půl deváté večer jsme šli domů.,

Jim McWhir, vědec z kmenových buněk, Roslin: vzpomínám si, že jsem přišel den po vypuknutí embarga a na parkovišti bylo několik satelitních dodávek.

Wilmut: všude byly televizní kamiony. Šel jsem a mluvil o dobré ráno Americe.

Griffin: CBS, NBC, ABC, BBC, all there wanting interview with Ian, wanting to see the sheep. Byl to chaos. Nemyslím si, že můžete někdy ocenit intenzitu médií v plném letu, pokud jste zažili sami.

McWhir: bylo to jen pandemonium. Jít dolů k jednotce velkých zvířat, byl to jen Les blesků a reportérů. Bylo to úžasné. Jen jsem se otočil a vrátil se do práce.

Griffin: moje sekretářka odložila telefon a okamžitě zazvonilo. Jedno ze jmen, o kterých jsem slyšel, bylo Harold Shapiro . Řekla: „Ian Wilmut s tebou teď nemůže mluvit, můžeš zavolat později?,“Bill Clinton ho požádal, aby se do 90 dnů ohlásil o etických důsledcích klonování. Zaslechl jsem jeho jméno a řekl: „ne, určitě s ním chceme mluvit.“

Colman: když jste vloženi do projektu, máte to, co považujete za dobré vědecké důvody pro to. Všechno, co jsme udělali, byla Etická komise. Zažili jsme spoustu obav o zdraví zvířat. Náš zájem byl spíš o takové reakce. Nedělali jsme to jako předehru k klonování lidí.

Griffin: lidé v médiích opakovaně tlačili na tento bod., Byli jsme obviněni z udržování Dollyho narození tajemství, protože jsme uvažovali klonování člověka. Měli jsme v tom jasno: bylo to neetické a nebezpečné.

Wilmut: jde to s prací. Musíte jen vysvětlit, že tomu tak není.

Schnieke: v Evropě to bylo okamžitě považováno za negativní. „Co udělali teď a co mohli dělat dál?“Měli jsme policii v ústavu, který vysvětlil, co děláte, když tam je bomba vyděsit. Balíky byly prověřovány na výbušniny.,

Walker: vzpomínám si Ian Wilmut osobní asistent, Jackie, dostat telefonní hovory poté, co to všechno hit tisku. Měla spoustu telefonátů, některé z nich byly trochu crackpot, od lidí, kteří chtěli, aby jejich psi klonovali. Smutnější byli ti lidé, kteří ztratili děti nebo kteří měli nemoci sami, a to bude průlom, který by mohl léčit různé nemoci.

Colman: Zdálo se, že Dolly zachycuje představivost. Bylo to chlupaté zvíře. Mít jméno, které bylo identifikovatelné, nesmírně pomohlo.,

Bracken: kdyby byla viděna jako zvíře, které bylo uzamčeno, že ne mnoho lidí vidělo, to by mohlo mít větší špatnou publicitu. Ale myslím, že kvůli otevřenosti, že lidé mohli jít a navštívit ji a ukázat se kolem, to pomohlo při přijímání veřejnosti.

Griffin: pro kameru si vedla dobře a všichni viděli, že je naprosto normální zvíře. Protože byla přístupná a fotogenická, stala se nejslavnější ovcí na světě. Každý marketingový manažer by za to zabil., Na některých obrázcích je to, jako by se rozhovor s médii.

Walker: vzal jsem fotografa dolů vidět Dolly. Ten chlap vyrobil dětskou korunu, malou zlatou věc. Řekl jsem: „nemyslím si, že bychom měli.“Všichni jsme velmi chtěli nedovolit, aby se Dolly stala humanizovanou. Byla to ovce a to bylo vše.

Bracken: daleko od médií a kamer, snažili jsme se s ní zacházet stejně jako s ostatními ovcemi, ne jako s nějakou celebritou, kterou se zjevně stala.,

Walker: poprvé byla ostříhané, vzali vlny, které mám, ve skutečnosti — být pletené do jumperu pro cystickou-fibróza charitu. Viděl jsi ji v muzeu? Teď je za skleněným pouzdrem, protože jí lidé pořád štípali kousky vlny. Alespoň jsem si vzal vlnu, když byla ještě naživu.

Dolly žila šest a půl roku a sama porodila několik jehňat. Ale v roce 2003 začala vykazovat známky nemoci.

Bracken: byl to valentýnský den. Myslím, že to byl pátek. Věděli jsme, že existuje potenciál, aby se toto onemocnění plic vyvinulo.,

Griffin: trpěla nemocí zvanou jaagsiekte. Je to onemocnění plic a jedna nebo dvě další ovce předtím šel dolů s ním.

Wilmut: mysleli si, že by měla být rentgenována na veterinární škole. Překvapila je velikost nádoru v plicích. Za těchto okolností jsme diskutovali o tom, jak moc bychom se měli snažit, aby se zotavila. Nebylo by laskavější nechat ji jít? Tak jsme ji utraceli. Jste zodpovědní za dobré životní podmínky zvířat na vašem projektu.,

o deset let později zasáhla vědecký tým smrt Keitha Campbella další ztráta.

Colman: Keith byl hnací silou. Byl to člověk, který udělal důležitou experimentální práci, která zasela semena protokolu, který jsme všichni použili. Dolly by se bez Keitha neobešla.

Ritchie: Keith byl, myslím, „neobvyklý“ je pravděpodobně věc, kterou byste o něm řekli. Byl docela hippie., Řídil Volkswagen Beetle, kouřil rolling-up, měl dlouhé vlasy.

Colman: neměl velký vztah s Ianem. Byli to velmi odlišné osobnosti a často argumentovali.

Wilmut: nepamatuji si řádky. Někdy bychom měli trochu jiné priority.

je vždy velmi obtížné rozdělit rozpoznávání. To, co bylo zřejmě příčinou nějaké nepříjemnosti a některé kritiky je, že neměl dostat první autorství na Dolly papíru. Dostal absolutně všechny ostatní. Byly doby, kdy řekl, že papír Megan a Morag je ve skutečnosti důležitější než Dolly., Rozhodně byl frustrovaný, že jsem dostal FRS (kolega Královské společnosti) a nakonec rytířství.

po domácím sporu se Campbell 5. října 2012 zabil.

Colman: Keith byl můj velmi dobrý přítel a večer po práci jsme chodili na horská kola ve Skotsku. Mluvil jsem s ním tři dny před jeho smrtí. Byl jsem velmi šokován.

Walker: to mě zasáhlo velmi tvrdě, těžší, než bych si představoval. Neviděl jsem ho mnoho, mnoho let. V té době jsme byli tak blízko, těsná skupina. Museli jsme být.,

Colman: loni v lednu jsem šel na schůzku v Paříži, kde měli posmrtné ocenění. Vzali průzkum, kolik lidí v publiku pomáhal, co Keith udělal, a obrovské množství lidí dát jejich ruce nahoru.

techniky vyvinuté při tvorbě Dolly byly použity ke kopírování cenných hospodářských zvířat a výrobě transgenních zvířat. Ale v biomedicínských laboratořích Dolly naznačil budoucnost, ve které by buňky mohly být přeprogramovány do embryonálního stavu a použity k léčbě lidských onemocnění.,

Wilmut: narození Dolly obrátilo pravidla vývoje vzhůru nohama a přimělo mnoho biologů myslet jinak.

Jeanne Loring, biolog kmenových buněk, Výzkumný ústav Scripps, La Jolla, Kalifornie: to byl nástup klonování skotu, který je nyní docela populární. Tam je obrovská hodnota v tom, že je schopen zlepšit dobytek, a to dalo lidem jiný nástroj.

George Seidel, reprodukční biolog zvířat, Colorado State University, Fort Collins: existují klonovaní býci produkující sperma, které se prodává., Tam je Angus bull s názvem konečná odpověď, má půl milionu potomků, nebo něco takového. Jeho klon se tedy jmenuje Final Answer II a jeho sperma si můžete koupit za poloviční cenu. Moje žena a já máme dobytek ranč, takže používáme konečnou odpověď II. Peklo, je to stejná genetika. Ale z teoretického hlediska, transgenní věci je opravdu mnohem důležitější než jen dělat kopie. Abychom vytvořili naši první transgenní krávu, vytvořili jsme tisíce embryí. Bylo to obrovské úsilí. Desetina peněz, desetina zvířat je to, co by pro vás mohla udělat transgenics plus klonování.,

Robert Lanza, chief scientific officer, Astellas Institute for Regenerative Medicine, Marlborough, Massachusetts: byl jsem nadšený. Nyní bychom snad mohli použít stejnou techniku-ne tolik pro zvířata a zemědělství-ale pro léčbu dlouhého seznamu lidských nemocí. To, co Dolly ukázala, byla obrovská síla této technologie a kouzlo vajíčka. Ve vejci byly faktory, které by mohly vzít dospělé buňky zpět včas a obnovit je do embryonálního stavu.

Shinya Yamanaka, vědec z kmenových buněk, Kjótská univerzita, Japonsko: moje počáteční odpověď byla “ Wow!, Je to jako sci-fi.“Ale nebylo to něco, na čem jsem plánoval pracovat. Soudě podle článku je klonovací proces velmi technicky náročný. V příštím roce vyšel první papír lidských embryonálních kmenových buněk. To je, když jsem přehodnotil Dolly. Myslel jsem, že alespoň teoreticky bychom měli být schopni přeprogramovat somatické buňky zpět do embryonálního stavu, abychom mohli vytvářet ES-jako kmenové buňky přímo z kůže nebo krevních buněk.

McWhir: výsledek jako Dolly zastaví lidi ve svých stopách a říkají: „dobře vydržte. Pokud bych řekl, že je to nemožné, co jiného říkám, je nemožné?,“

Schnieke: máte nějaké experimenty, kde vyvolává váš srdeční tep. Dolly byla jedna.

Ritchie: je to něco jako mít děti. Nemám žádné sám. Možná je Dolly takové dítě.

Wilmut: bylo by špatné říci mé jméno je známo po celém světě – ale Dolly je.

---