proma Connections
je smutné, že poznáváme průchod Dr. Fredericka Sangera. Sanger je známý molekulárním biologům a biochemikům po celém světě pro svou techniku sekvenování DNA, která pro něj získala Nobelovu cenu za chemii v roce 1980.
také pozoruhodné, sangerova laboratoř provedla první úplnou sekvenci genomu, genomu virové DNA o délce více než 5 000 párů bází.
cena 1980 byla Sangerova druhá Nobelova cena, jeho první udělená v roce 1958 za stanovení chemické struktury proteinů., V této práci Sanger objasnil nejen aminokyseliny, které obsahovaly inzulín, ale také pořadí, v jakém se aminokyseliny vyskytly.
O sekvenování Sanger
sekvenování DNA je také známé jako metoda řetězového ukončení sekvenování. Technika Sanger používá v reakci dideoxynukleotidy nebo ddNTPs kromě typických deoxynukleotidů (dNTPs). ddNTPs vést k ukončení řetězce DNA, protože ddNTPs postrádají 3′-OH skupinu potřebné pro phosphodiester dluhopisů tvorbu mezi nukleotidy. Bez této vazby je řetězec vznikajících nukleotidů ukončen.,
Sanger sekvenování vyžaduje single-stranded DNA, DNA primer (buď radioaktivně značený nebo s fluorescenční značku), DNA polymeráza, dntp a ddNTPs. Čtyři reakce jsou nastaveny, jeden pro každý nukleotid, G, A, T a C. V každé reakční všechny čtyři dntp jsou zahrnuty, ale pouze jeden ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP nebo ddTTP), které zní. Sekvenční reakce se provádějí a produkty, denaturované a odděleny podle velikosti pomocí polyakrylamidové gelové elektroforézy.
Tato reakce mix výsledky v různých délkách fragmentů, které reprezentují, například umístění každého nukleotid v sekvenci, protože i když tam je více dATP, než ddATP v reakci, tam je dost ddATP, že každý ATP nakonec místo toho je nahrazen s ddATP, což vede k ukončení řetězce. Separace pomocí gelové elektroforézy odhaluje velikost těchto fragmentů obsahujících ddATP, a tedy umístění všech nukleotidů v sekvenci. Podobné informace jsou poskytovány pro GTP, CTP a TTP.,
metoda sekvenování DNA Maxam a Gilbert měla výhodu v době použití s dvouvláknovou DNA. Nicméně, tato metoda vyžaduje DNA strand oddělení nebo frakcionací restrikční enzymové fragmenty, což má za následek poněkud časově náročnější technika, ve srovnání s roce 1977 metodu publikoval Sanger et al.
Dr. Sanger se narodil v Gloucestershire ve Velké Británii v roce 1918, syn lékaře. Ačkoli zpočátku plánoval následovat svého otce do medicíny, biochemie se stala jeho celoživotní vášní a oblastí výzkumného úsilí., Sanger odešel do důchodu ve věku 65, trávit více času na koníčky zahradnictví a lodičky.