Angstdæmpende-Lignende Effekter af Bergamot Æterisk Olie Er Ufølsomme over for Flumazenil i Rotter

Abstrakt

Angst er en af de mest almindelige psykiske lidelser, og benzodiazepiner (BDZs), der handler om gamma-aminosmørsyre type A (GABA-A) – receptor-komplekset, repræsenterer de mest almindelige medicin, angstdæmpende midler i verden. Imidlertid fremkalder kronisk BD. – brug flere bivirkninger. Angiveligt, aromaterapi er sikrere for håndtering af angst., Bergamot æterisk olie (BEO) ekstraheret fra Citrus bergamia Risso et Poiteau frugt, ligesom andre æteriske olier, er meget udbredt i aromaterapi til at lindre symptomer på stress-induceret angst. Det er interessant, prækliniske data tyder på, at BEO inducerer angstdæmpende-gerne/afslappende effekter i dyr adfærdsmæssige opgaver, der ikke superimposable til dem af benzodiazepin diazepam. For bedre at belyse inddragelsen af Gabaerge transmission, den foreliggende undersøgelse, der undersøger effekten af forbehandling med flumazenil (FLZ), et benzodiazepin site antagonist, på BEO effekter ved hjælp af open field opgave (OFT) i rotter., De opnåede data viser, at FL.ikke påvirker phytocomple .ens adfærdsmæssige virkninger væsentligt. Disse resultater viser manglen på overlapning mellem Beo og BD.adfærdseffekter, hvilket bidrager til karakteriseringen af den neurobiologiske profil af den æteriske olie til dens rationelle anvendelse i aromaterapi.

1. Introduktion

flere æteriske olier ekstraheret fra frugter tilhørende Citrus slægten anvendes i aromaterapi til behandling af angst, søvn, humør og kognitive lidelser . Det antages, at bergamot stammer fra Citrus aurantium L. og Citrus limon L., eller Citrus aurantifolia s Swinging . Bergamot æterisk olie (BEO) som er fremstillet ved kold presning af epicarp og dels af mesocarp af friske frugter af Citrus bergamia Risso et Poiteau, ifølge de italienske Farmakopé XII ed. BEO består af en flygtig fraktion (93-96% af det samlede antal), der indeholder iltet derivater (såsom linalool) og sesquiterpene, og monoterpen carbonhydrider (såsom limonen) og en permanent del (4-7% af det samlede antal), der indeholder polymethoxylated flavones, voks, coumarins, og psoralens som bergamottin (5-geranyloxypsoralen) og bergapten (5-methoxypsoralen) ., Limonen, γ-terpinen og β-pinen er sammen med linalool og linalylacetat blandt de mest udbredte forbindelser, der findes i den flygtige fraktion, og udgør alle tilsammen >90% af hele olien . I det sidste årti har prækliniske studier understøttet den terapeutiske anvendelse af BEO. Især er bergamotolie udstyret med bemærkelsesværdige neurobiologiske virkninger, der delvis stammer fra en interferens med basale mekanismer, der finjusterer synaptisk plasticitet under fysiologiske og patologiske tilstande, dvs., hjerneiskæmi, smerter og adfærdsmæssige og psykologiske symptomer på demens . Under basal tilstand hæver BEO ekstracellulære niveauer af diskrete aminosyrer med neurotransmitterfunktion efter systemisk eller fokal administration i hippocampus af frit bevægelige rotter . Desuden øger systemiske doser af BEO det elektrokortikografiske korrelat af alarm, vågenhed og afslapning ., Kapacitet af BEO at ændre EEG frekvens, i forbindelse med indberetning og afslapning, understøtter data, der viser, angstdæmpende-afslappende effekter efter systemisk eller inhaleret administrationen af denne phytocomplex i dyrenes adfærdsmæssige opgaver. Interessant nok opnås kontroversielle resultater, der sammenligner virkningerne af BEO med virkningerne af dia .epam (D .p). I virkeligheden, mens Saiyudthong og Marsden spekulere i, at aktive komponenter af phytocomplex interagere med BDZ websted på GABA-A-receptoren komplekse inducere en angstdæmpende virkning , vi har for nylig vist de egenskaber, BEO, der ikke overlapper med virkningerne af DZP ., Da Gabaerge transmission spiller en central rolle i patofysiologien af angst, at få mere indsigt om den mekanisme, der er involveret i anxiolytisk-lignende effekter af BEO, formålet med denne undersøgelse er at undersøge effekter af flumazenil, en antagonist på BDZ bindende stedet, på den adfærd, der er fremkaldt af BEO i open field testen (OFT) i rotter.

2. Materialer og metoder

2.1., Dyr

Han Wistar rotter (250-300 g; Charles River, Calco, Italien) var opstaldet i grupper af fire i standard laboratorium bure (40 × 25 × 15 cm) ved konstant temperatur (22 ± 1°C) og den relative luftfugtighed (50%) i henhold til en regelmæssig lys-mørke tidsplan (lys på 7 morgen til 7 p.m.). Før OFT-eksperimentet fik rotter en uges tilpasning til laboratoriebetingelserne med fri adgang til mad og vand. Rådets direktiv om Det Europæiske Fællesskab af 24. November 1986 (86/609/EØF)og L. D. 4. Marts 2014 nr., 26 er blevet fulgt for at minimere antallet af anvendte dyr, der stadig genererer pålidelige resultater.

2.2. Materialer

2.3. Eksperimentel Procedure

akklimatiseringen af rotterne blev udført i 2 timer på forsøgsdagen. Dyrene blev udsat for habituation. Tilfældige eksperimentelle grupper blev dannet. Rotterne gennemgik intraperitoneal (IP) administration af BEO (500 µL/kg) eller jojobaolie. I. p. af FLZ (3 mg/kg), vende tilbage BDZ effekter i OFT , eller dennes køretøj (tween i saltvand) blev administreret som forbehandling 15 minutter tidligere., Efter tredive minutter blev adfærdseffekter evalueret ved hjælp af testen . Denne eksperimentelle protokol er i overensstemmelse med litteraturdata, hvor forbehandling med FL .vender adfærdseffekter af forskellige naturlige produkter i OFT hos gnavere.

rotten blev observeret fra en skærm i et nær laboratorium, siden testen blev optaget med et lukket kredsløbskamera. Adfærdstest blev udført mellem 09.00 og 13.00 i henhold til døgnrytmen. Videooptagelser blev underkastet følgende undersøgelse af en blindet (uvidende om behandlingerne) observatør., En overdosis isofluran blev brugt til at aflive dyret efter eksperimentet. Adfærdsmæssige værelset var ventileret, og arenaen blev vasket med vand og renses op med 70% ethanol efter daglige sessioner for at undgå en eventuel resterende lugt spor af BEO og ekskrementer.

2.4., Open Field Test

open field testen betragtes som en indikator for den følelsesmæssige tilstand af dyr, der giver en nem og forholdsvis hurtig vurdering af veldefinerede adfærd, såsom passage, væg opdræt, pleje, center, og immobilitet, og det er meget brugt i screening af lægemidler, der virker på centralnervesystemet (CNS) . Især, passage og væg opdræt kan være, henholdsvis, betragtes som indikatorer for motorisk aktivitet og udforskende adfærd, der henviser til, at grooming, center, og immobilitet er adfærd positivt korreleret med frygt eller emotionalitet ., Rotten blev placeret i midten af en mørk plastisk cirkulær arena (75 cm i diameter) i et lydisoleret rum med 20 Lu .lys. Varigheden af hver adfærdssession var 20 min. De vurderede parametre (generel motorisk aktivitet i et interval på 5 min (square grænse krydsninger med både foran og væggen opdræt), angst-relateret adfærd (ansigt og krop grooming, hoved vask, og tid brugt i centrum af arena), og immobilitet) blev optaget på video og analyseres for at blive scoret (Labehaviour).

2, 5., Statistik

statistisk analyse bestod af envejs-eller tovejs ANOVA, efterfulgt af Tukeys multiple sammenligningstest ved hjælp af Graph Pad 6 6.0. værdi <0, 05 blev betragtet som statistisk signifikant.

3. Resultater

tovejs ANOVA-analyse indikerer forskelle mellem behandling og tid med hensyn til hyppigheden af krydsning og vægopdræt (tabel 1). Især reducerer Beo-administration begge adfærd, der når statistisk signifikans sammenlignet med Ctr-gruppen (Figur 1)., Systemisk administration af FL., 15 min før BEO, ændrer ikke faldet i hyppigheden af krydsning og vægopdræt målt hos rotter behandlet med den æteriske olie (Figur 1).

envejs ANOVA-analyse indikerer også forskelle i pleje, center og immobilitetstid (tabel 2). Der ses et statistisk signifikant fald for grooming hos de dyr, der behandles med BEO versus Ctr-gruppen. Forbehandling med FL.er ikke i stand til at forhindre denne effekt (figur 2).,

med hensyn til perioden midt i arenaen indikerer resultaterne, at systemisk administration af BEO reducerer denne adfærd og opnår statistisk signifikans sammenlignet med Ctr-gruppen (figur 2). Forbehandling med FL.påvirker ikke denne effekt af BEO, selvom det er vist en lille tendens () mod en stigning i den tid, der bruges i midten (figur 2).

endvidere bruger dyrene, der behandles med BEO, selvom de stadig er opmærksomme, mere tid i immobilitet sammenlignet med kontrolgruppen (figur 3)., Interessant nok observeres det i dyrene forbehandlet med FL.en tendens til at reducere immobilitet observeret i BEO-gruppen, selvom der ikke beregnes nogen statistisk forskel () (figur 3).

for alle de undersøgte parametre påvirker forbehandling med FL .i kontrolgruppen ikke dyrs adfærd i de ofte understøttende litteraturdata ved anvendelse af et bredt dosisområde på 0, 1–10 mg / kg.

4., Diskussion

BEO bruges som andre æteriske olier i vid udstrækning i aromaterapi for at minimere symptomer på stressinduceret angst, selvom den underliggende mekanisme og dens interferens på Gabaergisk transmission stadig skal belyses .

Administration af BEO udøver an .iolytisk-lignende virkninger i ofte ikke signifikant modvirket af FL., en BD. – antagonist. Sidstnævnte resultater bekræfter, at Beo ‘s egenskaber ikke er parallelle med BD.’ erne., Her har vi observeret, at lokomotorisk aktivitet og udforskningsadfærd målt ved Krydsnings-og vægopdrætsfrekvenser er reduceret hos de dyr, der er behandlet med BEO sammenlignet med køretøjsgruppen, og forbehandling med FL.kunne ikke forhindre virkningerne af phytocomple.. I den 20-minutters OFT-session måles det desuden en reduktion i Beo ‘ s plejeadfærd, som ikke påvirkes af forbehandling med FL.. Alt i alt indikerer disse resultater, at BD. – receptor ikke er involveret i disse virkninger af BEO., Forbehandling med FL.forhindrer delvist BeOS virkninger på immobilitet og tid brugt i centrum af arenaen, dvs. adfærd positivt korreleret med frygt eller følelsesmæssighed, selvom dette ikke nåede statistisk betydning. Interessant nok ville sidstnævnte understøtte en involvering af GABA-A-receptor i virkningerne af BEO på disse adfærd. GABA-A-receptor indeholder det isosteriske sted for det endogene ligand og flere forskellige allosteriske bindingssteder, som indirekte modulerer receptorens aktivitet og er målene for forskellige syntetiske og naturlige forbindelser ., Molekyler med forskellige kemiske strukturer og affiniteter påvirker bindingsstedet og udviser forskellige farmakologiske virkninger. Især kan flere farmakologiske virkninger tilskrives moduleringen af specifikke alfa-underenheder . For eksempel medieres beroligende og hypnotiske egenskaber af GABA-A-receptorer indeholdende alfa-1-underenheder, hvorimod positiv modulering af GABA-A-receptorer ved alfa-2 og/eller alfa-3-underenheder viser an .iolytiske virkninger .,

interessant nok har vi tidligere vist, at systemisk administration af BEO inducerer en moderat frigivelse af GABA i hippocampus af frit bevægelige rotter . Dette neurokemiske fund sammen med virkningerne af FL.på immobilitet og center rapporteret her kunne understøtte hypotesen om, at nogle af forbindelserne, der er til stede i phytocomple .en, kan forstyrre GABA-A-receptormedieret transmission. Flere undersøgelser har undersøgt inddragelsen af denne neurotransmission i de An .iolytiske lignende virkninger af enkelt flygtige forbindelser, der findes i æteriske olier, såsom BEO., Især antyder forfatterne, at administrationsvejen for Forbindelserne kunne modulere deres virkning på BD. – stedet, der påvirker an .iolytiske virkninger. Inducerer linalool, administreret ved indånding, an .iolytiske virkninger forhindret af FL., mens systemisk administration ikke producerer an .iolytiske virkninger. Desuden, systemisk administration af en blanding af cis-og trans – (+)- limonen epoxid inducerer angstdæmpende virkninger, der er forhindret ved forbehandling med FLZ . Når (R)-(+)-limonen administreres ved indånding, blokeres an .iolytisk virkning imidlertid ikke af BD. – stedantagonisten.,

andre neurotransmittersystemer er blevet impliceret i de An .iolytiske lignende virkninger induceret af æteriske olier. For eksempel har mus, der udsættes for indånding af citronolie, en antistresseffekt gennem modulering af dopaminerge, serotonerge og GABAerge neurotransmission . Indånding af lavendel æterisk olie viser angstdæmpende virkning at øge niveauet af serotonin (5-HT) i den præfrontale cortex, striatum , og hippocampus ., Desuden blokerer WAYAY100635, en 5 – HT-receptorantagonist, virkningen af den essentielle lavendelolie, mens brugen af antagonister af GABA-A-receptor er blottet for virkning . Lignende data opnås også af Galdino et al. og af Tabari et al. der har observeret angstdæmpende virkning efter systemisk injektion af Spiranthera odoratissima og Rose geranium æteriske olier modvirket af forbehandling med 5-HT1A-receptor-antagonister, men ikke af FLZ .,

alt i alt understøtter disse data hypotesen om, at de An .iolytiske lignende virkninger af æteriske olier og sandsynligvis af BEO kan understreges af flere komplekse mekanismer, som fortjener yderligere undersøgelse.

5. Konklusion

BDS ‘ er er veludviklede og almindeligt ordinerede lægemidler, der bruges til behandling af angstlidelser; imidlertid kan flere bivirkninger (f.sløvhed, svimmelhed, døsighed, sedation og afhængighed) være alvorlige, så udvikling af nye lægemidler er nødvendig., Disse bivirkninger har bedt spredning af aromaterapi, selvom begrænsede data er tilgængelige om de mekanismer, der ligger til grund an .iolytisk aktivitet af de æteriske olier. Resultaterne af vores undersøgelse bidrager til at uddybe karakteriseringen af den neurofarmakologiske profil af BEO. Sidstnævnte støtter hypotesen om, at de An .iolytiske lignende virkninger af denne phytocomple.ikke er overlejrede til BD. ‘ er og til dens aromaterapeutiske anvendelse til behandling af stressinduceret angst.,

datatilgængelighed

de data, der bruges til at understøtte resultaterne af denne undersøgelse, er tilgængelige fra den tilsvarende forfatter efter anmodning.

interessekonflikter

forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikter vedrørende offentliggørelsen af dette papir.

anerkendelser

forfatterne takker Guido Fico For dygtig teknisk support. Dette arbejde blev støttet af University of Calabria “e.kvote 60%.”

---