Dolly på 20: Indersiden historien om verdens mest berømte får

Jeff J. Mitchell/Reuters

Dolly, det første klonede pattedyr fra en voksen celle, blev født den 5 juli 1996. Men hun blev oprettet fem måneder tidligere, i et lille rum på Roslin Institute uden for Edinburgh, Storbritannien.

Karen Karenalker, embryolog, PPL Therapeutics: den dag vi lavede Dolly, havde vi sådan en skidt dag.,Bill Ritchie, embryolog, Roslin Institute: det var 8.februar 1996. Jeg slog det op. Vi ved, det var en Skrald dag: vi havde forskellige problemer med infektioner og ting.

Walkeralker: det”s en skam bygningen er blevet revet ned, ellers kunne man se det rum, hvor Dolly blev foretaget. Jeg bruger ordet” værelse ” løst, for det var virkelig bare et stort skab, som, da Bill og jeg var derinde, du kunne bare få to stole og inkubatoren i.Ritchie: det var bogstaveligt talt skabet. Det var opbevaringsskabet for enden af laboratoriet., Da vi fik kamera besætninger i senere, de kunne ikke tro det, der var ikke plads til at skyde.

Walkeralker og Ritchie var en del af et projekt på Roslin Institute og spin-off PPL Therapeutics med det formål at foretage præcise genetiske ændringer af husdyr., Det videnskabelige team, ledet af Roslin-embryolog Ian .ilmut, begrundede, at den bedste måde at foretage disse ændringer ville være at finjustere genomet til en celle i kultur og derefter overføre kernen til en ny celle.Ritchie: den enkle måde at beskrive nuklear overførsel på er, at du tager en oocyt, et ubefrugtet æg, og du fjerner kromosomerne. Derefter tager du en komplet celle, der indeholder både mandlige og kvindelige kromosomer — alle vores celler gør, bortset fra gonaderne., Du tager den celle og smelter den til det enukleerede æg, aktiverer det-som begynder at vokse-og overfører det til en surrogatmor. Forhåbentlig, med dine fingre krydset, du vil få en klonet afkom, en kopi af dyret du”ve taget denne celle fra.

Walkeralker: kedelig er absolut ordet. Du sidder, kigger ned et mikroskop, og du har begge hænder på mikromanipulatorerne. Det ” s slags ligesom joysticks børn bruger i dag på spil. Hvis din albue gled, kan du tørre hele skålen ud.,et år tidligere havde holdet produceret tvillingfår, ved navn Megan og Morag, ved at klone dyrkede embryonale celler i et forsøg ledet af Roslin-udviklingsbiolog Keith Campbell. Men på denne dag i februar 1996 betød problemer med de føtalcellelinjer, de havde planlagt at bruge, at de ville have brug for en anden nuklear donor.Walkeralker: min hukommelse er at klappe som en kylling og tænke: “Hvad skal vi lægge i?”fordi cellerne vi skulle bruge aren” t der. Den sidste ting, du vil gøre, er at spilde de oocytter, du”har fået. Vi ville i det mindste prøve noget.,Angela Scott, cellekulturtekniker, ppl: jeg modtog ord fra Karen for at sige, at de celler, de forventede, var blevet forurenet. De spurgte mig, om jeg havde nogen celler, som de kunne bruge. De celler, jeg havde, var epitelceller fra får: vi søgte at øge ekspressionen af proteiner i mælk. Disse var voksne celler.Alan Colman, forskningsdirektør, ppl: jeg var kommet fra en baggrund af nuklear overførsel med John Gurdon . Han ” d aldrig været i stand til at få en voksen frø ved hjælp af nuklear overførsel fra en voksen celledonor., Han ” d været i stand til at få haletudser ved hjælp af voksne celler, men han d aldrig været i stand til at få en voksen frø. Jeg didn ” t tror, det ville arbejde med voksne celler på alle. Men vi havde ingen anden cellelinje at gå med, så vi var alle enige om, at vi”d bruge disse bryst-kirtel celler og bare se, hvad der skete, få nogle erfaringer. Disse var fra en 6-årig får-midaldrende for et får.

Ian Ianilmut, embryolog, Roslin: dette er noget, der er forkert i dag. Dolly beskrives som det første pattedyr klonet fra en voksen celle. Hun ” s faktisk den første voksne klon, periode. Hun ” s ofte undersold.,

selvom klonede og transgene køer ville være mere værdifulde for industrien, arbejdede Roslin-teamet med får af praktiske grunde.

Wililmut: kvæg er utroligt dyre og har et langt generationsinterval. Får er meget billigere og meget lettere at arbejde med. Og vi kendte reproduktionsbiologien. Det var meget sandsynligt, at hvis vi kunne få noget til at fungere i får, ville det fungere i køer. Får er små, billige køer.

John Bracken, farm research assistant, Roslin: der ville være 40-60 dyr, der gennemgår kirurgi hver uge i ynglesæsonen., Det er en masse forskellige får i systemet, og der skulle overvåges meget præcist, så dyrene var på det rigtige sted på det rigtige tidspunkt.Walkeralker: Bill plejede at holde embryoner og oocytter — da han bragte dem tilbage fra gården — i sin top skjortelomme. Jeg didn ” t have en top skjorte lomme, så jeg plejede at putte dem inde i min bh. Det var en måde at holde dem varme og hente dem tilbage i laboratoriet og få dem ind i et ordentligt kontrolleret miljø. Jeg don”t tror inde i min bh var frygtelig kontrolleret, men hverken var Bill” s top skjortelomme.,Ritchie: den dag vi lavede Dolly, ville jeg have gjort enucleation, og hun ville have gjort fusionen. Det var vores normale måde at gøre tingene på.lker: jeg lavede fusionen den dag, vi lavede Dolly. Bill og jeg joke, at han er mor og jeg er far, fordi, hovedsagelig, jeg var den efterligne, hvad sæden ville gøre.

de overførte 277 kerner fra brystcellelinjen — fra en hvidfaset race kendt som en Finn Dorset-til æg fra den hårdføre skotske blackface Race. Bare 29 af de resulterende embryoner blev implanteret i surrogat moderfår. Forventningerne var lave: det syntes næsten umuligt, at en voksen cellekerne kunne omprogrammeres for at give anledning til et levende dyr. De fleste klonede embryoner afbrudt, mange selv før en graviditet kunne bestemmes med ultralyd.

Wililmut: fåreavlssæsonen begynder i oktober og slutter i februar, marts-ish., Ved jul havde vi etableret graviditeter efter overførsel fra føtalceller, så det gik godt. Hvis vi ikke havde gjort det, ville vi sandsynligvis ikke have satset på at arbejde med det, der blev Dolly, brystcellerne.Angelika Schnieke, molekylærbiolog, ppl: jeg kan huske, at jeg mødte Ian .ilmut i kantinen, og han var meget skeptisk. Han sagde:”Jeg ville blive overrasket, hvis det virker, men PPL betaler for forsøgene, så vi gør dem.”

Bracken: vi scannede alle modtagere, der havde overført embryoner, og vi vidste, at de var vigtige får., Hver dag, at forskerne vidste, at vi scanner, ville de være meget ivrige efter at vide, om der var nogen graviditeter.Walkeralker: jeg gik ikke ned for at se alle scanningerne. Men med Dolly-fordi vi vidste, at det var celler Bill og jeg havde sat i — Jeg var gået ned på denne særlige dag med John.

Bracken: jeg var bare virkelig glad for, at det var en graviditet. Jeg didn”t klar over den virkelige betydning af det, fordi vi var” t virkelig fortalt. Vi vidste bare, at det var en vigtig graviditet. Det didn ” t bære den samme vægt. Vi tænkte ikke, ” Wowo!!, Hvis dette skrider frem til et levende lam, dette vil være en verdens tæppebanker, eller det”kommer til at vende videnskabelig forståelse på hovedet.”

Walkeralker: jeg ” d taget en tom video op med mig, så jeg kunne vise mine kolleger. Den video sidder op på mit loft, og til min Skam har jeg aldrig overført den til DVD. Det burde jeg.

Schnieke: jeg kan huske den dag, hvor vi havde den første scanning. Vi spurgte altid. Og så så vi billedet og scanningerne. Så skal du bare håbe, at det varer og går hele vejen igennem.,

Wililmut: min hukommelse er de ledte rundt dag 30 eller 35, så der er en anden 120 dage , hvor du holder på suk med lettelse og håber.

Reuters

Ian Wilmut med Dolly udstillet på National Museum of Scotland.

bare et par af holdmedlemmerne fik vidne til hendes fødsel.

Bracken: det skete omkring 4:30 om eftermiddagen. Så snart hun gik i arbejde, ringede vi til Dick Vet for at få en af deres dyrlæger til at komme ud., Selvom Douglas McGavin og jeg sandsynligvis havde 50 års erfaring mellem os, det ville bare have været uhørt, hvis vi”d besluttede, at vi ville hjælpe fødslen, og noget var gået galt.Ritchie: vi vidste, at Dolly var ved at blive født, og jeg tror, hun viste tegn på at komme i nærheden af læmning, og se og se, jeg gik igennem, og der var bits af Dolly, der blev født. Der var en dyrlæge der, så hun sørgede for, at dyret var okay og trak lammet ud.

Bracken: det var helt normalt. Ingen komplikationer overhovedet. Hun var et meget levedygtigt lam., Hun kom meget hurtigt på fødderne, sandsynligvis inden for den første halve time, hvilket er en rigtig god indikation af, at tingene er normale.Ritchie: jeg tror, jeg sprang op og ned, da jeg så det hvide ansigt.

Scott: Karen var væk ved et bryllup på det tidspunkt.Walkeralker: jeg havde givet hende hotellets fa .nummer. Jeg ville ønske, jeg havde holdt den fa.. Det sagde: “hun har et hvidt ansigt og lodne ben.”

Scott: Jeg ved ikke, hvad de må have tænkt på hotellet: “Wowo., det er en virkelig usædvanlig baby.”

Wililmut: jeg var i tildelingen. Jeg havde et telefonopkald for at sige, at vi havde et levende lam., Jeg udstedte en instruktion om, at ingen skal være der, der didn”t nødt til at være der. Masser var nysgerrige. Jeg adlød min egen regel, fordi jeg ” ikke fik noget at bidrage med.

Bracken: jeg står ved siden af Douglas McGavin og ser dyrlægen hjælpe denne fødsel, og jeg lavede en off-the-cuff bemærkning til Douglas. Jeg sagde:”Ved du, hvad vi bliver nødt til at kalde dette lam? Vi”bliver nødt til at kalde det Dolly”, efter Dolly Parton, fordi cellerne er afledt af brystvæv.

Wililmut: at være noget puritansk, kunne jeg have været lidt bekymret. Bagefter var det uden tvivl et godt navn.,

Bracken: dette er hearsay. Jeg fik aldrig fortalt det direkte. Men jeg hørte de havde kontaktet Dolly Parton og sagde:”Vi har fået denne klonede får, der er opkaldt efter dig.”

Wililmut: jeg ved ikke, hvordan meddelelsen kom igennem, men vi fik at vide, at hendes agent havde sagt:”der var ikke noget som baaad-reklame.”Jeg ved ikke, om det er sandt.

i løbet af de næste par måneder bekræftede teamilmuts team, at Dolly var en klon af brystcellelinjen, og skrev resultaterne op. Hendes fødsel skulle holdes tophemmelig, indtil Naturpapiret, der beskriver eksperimentet, kunne offentliggøres i februar 1997 (I., Wilmut et al. Natur 385, 810-813; 1997).Harry Griffin, videnskabelig direktør, Roslin: to eller tre måneder før offentliggørelsen af papiret fik jeg at vide om det. Med hensyn til forberedelse var PPL involveret. De så det som en mulighed for at få reklame for sig selv. Vi arbejdede med deres PR-virksomhed, de Facto. Vi gjorde en hel del forberedelse.,

Wilmut: Ron James, der var den daglige leder af PPL therapeutics, og jeg blev nævnt som den primære talsmænd-og givet en smule træning af ex-BBC-folk, der først og fremmest kom op og temmelig aggressivt fast mikrofoner op på vores næser og spurgte aggressive spørgsmål, og efterfølgende gjorde det meget forsigtigt. Vi approachederen ” t nærmede i overalt nær den aggressive måde, de forsøgte først, som var ganske chokerende. Jeg ” m sikker på det var værd at have.Griffin: vi havde alt organiseret., Opkaldene ville blive rettet mod de Facto, og de ville forsøge at organisere en vis sammenhæng i vores svar med hensyn til, hvem der fik prioritet, og hvem der gjorde”t. alt dette ville kulminere, vi håbede, på torsdag, at papiret kom ud. Var det den 27. februar? Klart, det gjorde ” t.

Wililmut: Robin McKie på Observer lækket det. Han vil nægte anklagen.Robin McKie, videnskab og teknologi redaktør, The Observer, London: jeg didn”t se, at ting i naturen. Jeg don”t bebrejde ham for at være vred, men jeg gik til store smerter at undgå de ting, der ville få mig til at blive beskyldt for, at., Jeg havde hjulpet et par fyre, der lavede et TV-program om genetik, og de sagde, “Åh, forresten, de har klonet et får i Edinburgh.”Jeg didn” t tro dem, men jeg ringede et par mennesker i marken, og en af dem i Amerika bekræftede det. Men jeg var meget, meget bekymret. Jeg sagde noget ganske sensationelt, med absolut ingen papir bevis for noget, der var gået på. Jeg fortalte min stedfortrædende redaktør alt, hvad jeg vidste, og han fik mig til at skrive det. Så ramte lortet blæseren.,Griffin: Ian ringede til mig og sagde, at han lige var blevet kaldt op og fortalte, at observatøren skulle køre historien søndag før offentliggørelse i Nature.9 om søndagen, uden at vide, om folk kunne komme igennem. Telefonen ringede kontinuerligt. Vi havde en bi .ar omstændighed, hvor en telefon begyndte at ringe i et rengøringsskab. Da jeg svarede på det, var det, tror jeg, Daily Mirror, der på en eller anden måde havde fået denne forbindelse. Omkring halv ni om natten gik vi hjem.,

Jim McWhir, stamceller videnskabsmand, Roslin: jeg husker, at jeg kommer dagen efter, at embargoen brød, og der var flere satellit-vans i parkeringsanlægget.

Wililmut: der var tv-lastbiler overalt. Jeg gik og talte om Good Morning America.Griffin: CBS, NBC, ABC, BBC, alle der ønsker intervie .s med Ian, der ønsker at se fårene. Det var kaos. Jeg tror ikke, du nogensinde kan sætte pris på intensiteten af medierne i fuld flyvning, medmindre du har oplevet det selv.

Jeff J., Mitchell/Reuters

en søndagsnyhedsrapport om Dolly bragte intens medieopmerksomhed til Skotland.

Mcwhhir: det var bare pandemonium. Går ned til den store dyr enhed, det var bare en skov af flash pærer og journalister. Det var helt fantastisk. Jeg vendte mig bare om og gik tilbage på arbejde.Griffin: min sekretær ville lægge telefonen ned, og den ringede straks. Et af de Navne, jeg hørte blive nævnt, var Harold Shapiro . Hun sagde: “Ian canilmut kan ikke tale med dig nu, Kan du ringe tilbage senere?,”Bill Clinton havde bedt ham om at rapportere tilbage inden for 90 dage om de etiske konsekvenser af kloning. Jeg overhørte hans navn og sagde: “Nej, vi vil helt sikkert tale med ham.”

Colman: når du er indlejret i et projekt, har du det, du anser for at være gode videnskabelige grunde til at gøre det. Alt, hvad vi gjorde, var dækket af en etisk komit.. Vi havde været igennem en masse bekymringer om dyresundhed. Vores bekymring var mere om den slags reaktion. Vi doingeren ” t gøre det som en optakt til kloning mennesker.Griffin: folk i medierne pressede dette punkt gentagne gange., Vi blev beskyldt for at holde Dolly”s fødsel hemmelighed, fordi vi overvejede kloning et menneske. Vi havde vores holdning klar på det: det var uetisk og usikkert.

Wililmut: det går med jobbet. Du skal bare forklare, at dette ikke er tilfældet.

Schnieke: i Europa blev det straks set som et negativt. “Hvad har de gjort nu, og hvad kunne de gøre næste?”Vi havde politiet på instituttet, der forklarede, hvad du gør, hvis der er en bombe skræmme. Pakker blev screenet for sprængstoffer.,Walkeralker: jeg kan huske Ian .ilmuts personlige assistent, Jackie, få telefonopkald efter det hele ramte pressen. Hun havde masser af telefonopkald, nogle af dem var lidt crackpot, fra folk, der ønsker deres hunde klonet. De tristere var de mennesker, der havde mistet børn eller som selv havde sygdomme, og dette ville være et gennembrud, der kunne helbrede forskellige sygdomme.Colman: Dolly syntes at fange fantasien. Det var et lodent dyr. At have et navn, der kunne identificeres, hjalp enormt.,

Bracken: hvis hun”d blevet set som værende et dyr, der var låst væk, at ikke mange mennesker så, der kunne have foreviget mere dårlig omtale. Men jeg tror, på grund af åbenheden, at folk fik lov til at besøge hende og blive vist rundt, dette hjalp med at acceptere offentligheden.Griffin: hun klarede sig godt for kameraet, og alle kunne se, at hun var et helt normalt dyr. Fordi hun var tilgængelig og fotogen, blev hun det mest berømte får i verden. Enhver marketingchef ville have dræbt for det., I nogle af billederne er det som om hun intervie .e medierne.Walkeralker: jeg tog en fotograf ned for at se Dolly. Denne fyr produceret en kid ” s fest krone, en lille guld ting. Jeg sagde:”Jeg tror ikke, vi skal.”Vi var alle meget ivrige efter ikke at tillade Dolly at blive humaniseret. Hun var et får, og det var det.Bracken: væk fra medierne og kameraerne forsøgte vi at behandle hende ligesom de andre får, ikke som en slags berømthed, som hun selvfølgelig blev.,Walkeralker: første gang hun blev klippet, tog de ulden — som jeg har nogle af, faktisk — til at blive strikket i en jumper til en cystisk fibrose velgørenhed. Har du set hende på museet? Hun ” s bag en glaskasse nu, fordi folk holdt klemme stumper af uld fra hende. I det mindste fik jeg min uld, mens hun stadig var i live.Dolly levede i seks og et halvt år og fødte flere lam selv. Men i 2003 begyndte hun at vise tegn på sygdom.

Bracken: det var Valentine”s dag. Jeg tror, det var en fredag. Vi vidste, at der var potentiale for denne lungesygdom at have udviklet sig.,Griffin: hun led af en sygdom kaldet jaagsiekte. Det er en sygdom i lungerne og en eller to andre får på forhånd var gået ned med det.

Wililmut: de troede, at hun skulle Røntgenfotograferes på veterinærskolen. De blev overrasket over størrelsen af tumoren i hendes lunger. Vi diskuterede under disse omstændigheder, hvor hårdt vi skulle kæmpe for, at hun skulle komme sig. Ville det ikke være venligere at bare lade hende gå? Så vi aflivede hende. Du er ansvarlig for dyrenes velfærd på dit projekt.,

Roslin Institute/Univ. Edinburgh

Bill Ritchie på Roslin Institute.et årti senere ramte et andet tab det videnskabelige team med Keith Campbells død.

Colman: Keith var den drivende kraft. Han var den person, der gjorde det vigtige eksperimentelle arbejde, der såede frøene til den protokol, vi alle brugte. Dolly ville ikke være sket uden Keith.Ritchie: Keith var, jeg formoder,” usædvanligt ” er nok det, du ville sige om ham. Han var ret hippy., Han kørte en Volks .agen Beetle, røget roll-ups, havde langt hår.

Colman: han didn”t have en stor sammenhæng med Ian. De var meget forskellige personligheder og argumenterede ofte.

Wililmut: jeg kan ikke huske rækker. Vi ville have haft lidt forskellige prioriteter nogle gange.

det er altid meget vanskeligt at opdele anerkendelse op. Hvad var naturligvis årsagen til nogle irritation og nogle kritik er, at han didn”t få den første forfatterskab på Dolly papir. Han fik absolut alle de andre. Der var en tid, hvor han sagde Megan og Morag papir var faktisk vigtigere end Dolly., Han var helt sikkert frustreret over, at jeg fik en FRS (Fello.of the Royal Society) og i sidste ende en ridderdom.

efter en indenrigskonflikt dræbte Campbell sig selv den 5.oktober 2012.

Colman: Keith var en meget god ven af mig, og vi plejede at gå mountainbike i Skotland om aftenen efter arbejde. Jeg talte med ham tre dage før han døde. Jeg var meget chokeret.Walkeralker: det ramte mig meget hårdt, hårdere end jeg ville have forestillet mig. Jeg hadn”t set ham i mange, mange år. Vi var sådan en tæt, stram gruppe på det tidspunkt. Det måtte vi være.,Colman: jeg gik til et møde i Paris i januar sidste år, hvor de havde en posthum pris. De tog en stråmåling af, hvor mange mennesker i publikum var blevet hjulpet af, hvad Keith havde gjort, og et stort antal mennesker lagde Hænderne op.

de teknikker, der blev udviklet i oprettelsen af Dolly, blev brugt til at kopiere værdifulde husdyr og fremstille transgene dyr. Men i biomedicinske laboratorier antydede Dolly en fremtid, hvor celler kunne omprogrammeres til en embryolignende tilstand og bruges til at behandle menneskelige sygdomme.,

Wililmut: Dolly ‘ s fødsel vendte udviklingsreglerne på hovedet og fik mange biologer til at tænke anderledes.

Jeanne Loring, stamcellebiolog, Scripps Research Institute, La Jolla, Californien: Det var starten på kvægkloning, som faktisk er ret populær nu. Der er en enorm værdi i at kunne forbedre kvæg, og det gav folk et andet redskab.George Seidel, animal reproductive biolog, Colorado State University, Fort Collins: der er klonede tyre, der producerer sæd, der sælges., Der er en Angus tyr kaldet endelige svar, han fik en halv million afkom eller noget i den retning. Så hans klon kaldes Final Ans .er II, og du kan købe hans sæd til halv pris. Min kone og jeg har en kvæg ranch, så vi bruger endelige svar II. helvede, det er den samme genetik. Men fra et teoretisk synspunkt er de transgene ting virkelig meget vigtigere end bare at lave kopier. For at lave vores første transgene ko skabte vi tusindvis af embryoner. Det var en stor indsats. En tiendedel af pengene, en tiendedel dyrene er, hvad transgenics plus kloning kunne gøre for dig.,Robert Lan .a, Chief scientific officer, Astellas Institute for Regenerative Medicine, Marlborough, Massachusetts: jeg var begejstret. Nu kunne vi forhåbentlig anvende den samme teknik-ikke så meget for dyr og landbrug — men til behandling af en lang række menneskelige sygdomme. Hvad Dolly viste var den enorme magt af denne teknologi og magien i ægget. Der var faktorer i ægget, der kunne tage voksne celler baglæns i tiden og gendanne dem til en embryonal tilstand.

Shinya Yamanaka, stamcelleforsker, Kyoto University, Japan: mit første svar var “Wowo!!, Det er ligesom science fiction.”Men det var ikke noget, jeg planlagde at arbejde på. At dømme ud fra papiret er kloningsprocessen meget teknisk udfordrende. Det næste år kom det første menneskelige embryonale stamcellepapir ud. At ” s når jeg re-evalueret Dolly. Jeg troede, i det mindste i teorien, at vi skulle være i stand til at omprogrammere somatiske celler tilbage til embryonal tilstand, så vi kan fremstille ES-lignende stamceller direkte fra hud eller blodlegemer.

mc .hir: et resultat som Dolly stopper folk i deres spor, og de siger: “godt hænge på. Hvis jeg ” d har sagt det er umuligt, Hvad siger jeg ellers er umuligt?,”

Schnieke: du har nogle eksperimenter, hvor det bringer dit hjerteslag op. Dolly var en.Ritchie: det ” s slags som at have børn. Jeg har ikke noget selv. Måske Dolly ” s slags barn.

Wililmut: det ville være forkert at sige mit navn kendt hele vejen rundt om i verden — men Dolly”s er.