Promega-forbindelser
det er med sorg, at vi genkender Dr. Frederick Sanger ‘ s bortgang. Sanger er kendt af molekylærbiologer og biokemikere over hele verden for sin DNA-sekventeringsteknik, som vandt for ham 1980 Nobelprisen i kemi.
også bemærkelsesværdigt udførte Sanger ‘ s laboratorium den første komplette genomsekvens, den af et viralt DNA-genom mere end 5.000 basepar i længden.1980-prisen var Sanger ‘ s anden Nobelpris, hans første tildelt i 1958 for at bestemme den kemiske struktur af proteiner., I dette arbejde belyste Sanger ikke kun de aminosyrer, der omfattede insulin, men også den rækkefølge, hvori aminosyrerne forekom.
om Sanger sekventering
Sanger DNA sekventering er også kendt som kæde-terminering metode til sekventering. Sanger-teknikken bruger dideo .ynukleotider eller ddNTPs ud over typiske deo .ynukleotider (dntps) i reaktionen. ddNTPs resulterer i afslutning af DNA-strengen, fordi ddNTPs mangler den 3′ – OH-gruppe, der kræves til dannelse af phosphodiesterbinding mellem nukleotider. Uden denne binding afsluttes kæden af nukleotider, der dannes.,Sanger-sekventering kræver et enkeltstrenget DNA, en DNA-primer (enten radioaktivt mærket eller med et fluorescerende tag), DNA-polymerase, dntps og ddntps. Fire reaktioner er oprettet, en for hvert nukleotid, G, A, T og C. I hver reaktion er alle fire dNTP ‘ er inkluderet, men kun en ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP eller ddTTP) tilføjes. Sekventeringsreaktionerne udføres, og produkterne denatureres og adskilles efter størrelse ved hjælp af polyacrylamidgelelektroforese.
Denne reaktion mix resultater med forskellige længder af fragmenter, som repræsenterer, for eksempel placering af hver En nukleotid i den rækkefølge, fordi mens der er mere dATP end ddATP i den reaktion, der er nok ddATP, at hver enkelt ATP i sidste ende i stedet er erstattet med en ddATP, hvilket resulterer i kæden opsigelse. Separation ved gelelektroforese afslører størrelsen af disse ddatp-holdige fragmenter, og dermed placeringen af alle et nukleotid i sekvensen. Lignende oplysninger findes for GTP, CTP og TTP.,
Ma .am-og Gilbert DNA-sekventeringsmetoden havde fordelen på tidspunktet for at blive brugt med dobbeltstrenget DNA. Denne metode krævede imidlertid DNA-strengseparation eller fraktionering af restriktionsen .ymfragmenterne, hvilket resulterede i en noget mere tidskrævende teknik sammenlignet med 1977-metoden offentliggjort af Sanger et al.
Dr. Sanger blev født i Gloucestershire, Storbritannien i 1918, søn af en læge. Selvom han oprindeligt planlagde at følge sin far ind i medicin, biokemi blev hans livslange lidenskab og forskningsområde., Sanger trak sig tilbage i en alder af 65 år for at tilbringe mere tid på hobbyer med havearbejde og sejlsport.