Promega Connections (Deutsch)
Mit Trauer erkennen wir den Tod von Dr. Frederick Sanger. Sanger ist Molekularbiologen und Biochemikern weltweit für seine DNA-Sequenzierungstechnik bekannt, die für ihn 1980 den Nobelpreis für Chemie gewann.
Bemerkenswert ist auch, dass Sangers Labor die erste vollständige Genomsequenz durchgeführt hat, die eines viralen DNA-Genoms mit einer Länge von mehr als 5,000 Basenpaaren.
Der 1980-Preis war Sangers zweiter Nobelpreis, der 1958 erstmals für die Bestimmung der chemischen Struktur von Proteinen verliehen wurde., In dieser Arbeit erläuterte Sanger nicht nur die Aminosäuren, die Insulin enthielten, sondern auch die Reihenfolge, in der die Aminosäuren auftraten.
Über Sanger-Sequenzierung
Sanger-DNA-Sequenzierung wird auch als Kettenbeendigungsmethode der Sequenzierung bekannt. Die Sanger-Technik verwendet Dideoxynukleotide oder ddNTPs zusätzlich zu typischen Desoxynukleotiden (dNTPs) in der Reaktion. ddNTPs führen zur Beendigung des DNA-Strangs, da ddNTPs die 3′-OH-Gruppe fehlt, die für die Phosphodiester-Bindung zwischen Nukleotiden erforderlich ist. Ohne diese Bindung wird die Kette der gebildeten Nukleotide beendet.,
Die Sanger-Sequenzierung erfordert eine einzelsträngige DNA, einen DNA-Primer (entweder radioaktiv markiert oder mit einem fluoreszierenden Tag), DNA-Polymerase, dNTPs und ddNTPs. Vier Reaktionen werden eingerichtet, eine für jedes Nukleotid, G, A, T und C. In jeder Reaktion sind alle vier dNTPs enthalten, aber nur eine ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP oder ddTTP) wird hinzugefügt. Die Sequenzierreaktionen werden durchgeführt und die Produkte denaturiert und durch Polyacrylamidgelelektrophorese nach Größe getrennt.
Diese Reaktionsmischung führt zu verschiedenen Längen von Fragmenten, die beispielsweise die Position jedes A-Nukleotids in der Sequenz darstellen, da zwar mehr dATP als ddATP in der Reaktion enthalten sind, es jedoch genügend ddATP gibt, dass jedes ATP letztendlich durch ein ddATP ersetzt wird, was zu einer Kettenbeendigung führt. Die Trennung durch Gelelektrophorese zeigt die Größe dieser ddATP-haltigen Fragmente und damit die Orte aller Nukleotide in der Sequenz. Ähnliche Informationen werden für GTP, CTP und TTP bereitgestellt.,
Die Maxam-und Gilbert-DNA-Sequenzierungsmethode hatten zum Zeitpunkt der Verwendung mit doppelsträngiger DNA den Vorteil. Dieses Verfahren erforderte jedoch eine DNA-Strangtrennung oder-Fraktionierung der Restriktionsenzymfragmente, was zu einer etwas zeitaufwändigeren Technik führte, verglichen mit der 1977 von Sanger et al.
Dr. Sanger wurde 1918 als Sohn eines Arztes in Gloucestershire, Großbritannien, geboren. Obwohl er ursprünglich geplant hatte, seinem Vater in die Medizin zu folgen, wurde die Biochemie zu seiner lebenslangen Leidenschaft und seinem Forschungsgebiet., Sanger zog sich im Alter von 65 Jahren zurück, um mehr Zeit mit Hobbys wie Gartenarbeit und Bootfahren zu verbringen.