Vaikutukset Dimetyyliaminoetanoli ja Yhdiste Aminohappo D-Galaktoosi Aiheuttama Ihon Vanhenemista Malli Rotta

Tiivistelmä

kestävä unelma ihmisten on kumota tai lykätä ikääntyminen. Tässä tutkimuksessa dimetyyliaminoetanolin (DMAE) ja yhdiste aminohappoa (AA) Mesoterapia tutkittiin niiden mahdolliset antiaging vaikutuksia D-galaktoosi aiheuttama ikääntyminen ihon. 18 päivän kuluttua d-gal-induktiosta kutakin rotaa hoidettiin suolaliuoksen intradermaalisella mikroinjektiolla, joka oli 0,1% DMAE: ta, 0,2% DMAE: ta, 0,1% DMAE: ta + AA: ta ja 0,2% DMAE: ta + AA: ta., 42 päivän kuluttua hoidosta ihohaava korjattiin ja määritettiin. Mittaus orvaskeden ja ihon paksuus 0,1% DMAE + AA ja 0,2% DMAE + AA-ryhmät ilmestyi huomattavasti paksumpi kuin ikääntyminen control rats. Ryhmien välillä ei havaittu eroja kudosveden pitoisuudessa. Hydroksiproliini 0,1% DMAE + AA: ssa, 0,2% DMAE + AA: ssa ja sham-kontrolliryhmässä oli paljon korkeampi kuin kaikissa muissa ryhmissä. Kollageeni tyyppi I, tyyppi III, ja MMP-1: n ilmentyminen oli erittäin upregulated sekä 0.1% DMAE + AA ja 0,2% DMAE + AA-ryhmissä verrattuna ikääntymisen hallinnassa., Sen sijaan erilaisten ikääntyvien ryhmien TIMP-1-ilmaisutasot pienenivät huomattavasti verrattuna huijauskontrolliin. DMAE: n ja AA: n kolikointi kohdekudokseen on merkittävä antiaging-vaikutus D-galaktoosin aiheuttamaan rotan ihon vanhenemismalliin.

1. Johdanto

Antiaging on ikuinen aihe ja uneksia ihmisen., Ikääntymiseen liittyviä ihon muutoksia ovat väistämättömiä ja ovat harvennus, notko, ryppyjä, menetys joustavuus, alueilla kuivuus, ja inversed liikevaihto kollageeni tyyppi I/III suhde ihon, joka esitetään vähensi kollageenin tyyppi I, mutta upregulated kollageenin tyypin III . Tällä hetkellä mesoterapia on herättänyt kaikkien kiinnostuksen antiaging-strategiana., Se on vähän invasiivisia menettelyä, joka koostuu ihonsisäinen mikroinjektio farmakologiset aineita, kuten ravintoaineita, hormoneja, vitamiineja, entsyymejä, ja muut reagenssit, jotka on laimennettu ja annetaan suoraan alueen käsiteltävä. Steriileissä ja ammatillinen manipulointi, Mesoterapia on hyvin harvoin aiheuttaa ongelmia ihon infektion ja kuolion, lukuun ottamatta joitakin pieniä riskejä, kuten turvotusta ja kipua pistoksen aikana., Turvallinen, yksinkertainen, vähemmän kivulias menettely, joka on yksi niin sanottu ”lounasaikaan kosmeettisia menettelyt,” se ei vaadi toipumisaika, ja se on täydellinen ammattilaisille ja menestyvät ihmiset nopeatempoisessa moderni elämä .

– Dimetyyliaminoetanolin (DMAE), analoginen B-vitamiini, koliini ja on esiaste asetyylikoliinin, on saanut enemmän huomiota kuin jännittävä uusi ihonhoito täydentää tänään sen akuutit vaikutukset antiaging, antiwrinkle, ja ihon kiinteyttä. DMAE on tunnettu ulkoisesta käytöstä., Satunnaistetussa kliinisessä tutkimuksessa, 3% DMAE kasvojen geeli on osoitettu olevan turvallinen ja tehokas lieventäminen otsa linjat ja silmäkuopan hienoja ryppyjä ja parantaa huuli täyteläisyyttä ja muoto ja yleinen ulkonäkö kasvojen ihoa . Tutkimuksen avoin jatkaminen osoitti myös, että DMAE-geelin pitkäaikainen käyttö jopa 1 vuoden ajan liittyi hyvään turvallisuusprofiiliin ., Kuitenkin, trooppinen hoidon DMAE vaatii yleensä suuri annos ja pitoisuus läpi ihon läpäisevyys este, josta saattaa aiheutua koskee sen myrkyllisyyden, sivuvaikutuksia, ja lääketieteen kustannuksia. Se oli raportoitu, että 2,5–10 mmol/mL DMAE voi aiheuttaa vakuolaarisen solupatologia in vitro viljellyissä ihmisen fibroblastien soluja. Lisäksi tutkimukset osoittivat, että sovellus 3% DMAE geeli trooppisen voisi myös syntyä vakuolaarisen solupatologia kani korva orvaskeden solujen. DMAE: n vaihtoehtoista toimittamista tarvitaan, jotta voidaan arvioida suhteellinen teho ikääntyvän ihon parantamiseen.,

jotta voitaisiin arvioida mahdollisia antiaging vaikutuksia matala-annos DMAE intradermaalisesti, jonka paikallinen mikroinjektio (Mesoterapia), kudoksen rakenne ja kollageenin aineenvaihduntaa D-gal aiheuttama ikääntyminen ihon mitattiin tässä tutkimuksessa. Samaan aikaan, coinjection yhdiste aminohappoa (AA), mikä vähentää solujen myrkyllisyys DMAE injektio ja olla paikallinen ravinto tarjontaa, oli tutkittu niin hyvin. Myös niiden harkittu vaikutusmekanismi iholla kuvattiin.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1., Eläimet

Uros Wistar rotat ostettiin Institute of pharmaceutical Sciences (Qingdao, Kiina). Kaikki eläimet painoivat leikkaushetkellä 180-220 g. Eläinten hoito-ja tutkimussuunnitelma hyväksyttiin Affiliated Sairaala Qingdao University Medical School Institutional Animal Care and Use Committee.

yhteensä 80 Wistar-rotaa jaettiin satunnaisesti kuhunkin kokeelliseen ryhmään (KS.Taulukko 1)., Eläimiä kunkin hoito-ryhmän, lukuun ottamatta huijausta kontrolliryhmälle annettiin ihonalaisena injektiona D-galaktoosi (D-gal) annoksella 125 mg/kg·d 6 viikkoa aiheuttaa ihon vanhenemista malli rotta. 18 päivän kuluttua d-gal-injektion jälkeen jokainen rotta nukutettiin kloraalihydraatilla (0,25 mL / 100 g kehon paino) ja desinfioitiin sen lonkan alueella. 3 cm pyöreä tatuointi alue oli tehdasvalmisteiset kummallakin puolella rotta on hip ja sitten hoidettiin yleisanestesiassa kerran viikossa 4 viikon ajan, ihonsisäinen mikroinjektio suolaliuosta (NS), AA, 0.1% DMAE, 0.2% DMAE, 0.1% DMAE + AA, tai 0.,2% DMAE + AA, vastaavasti. Sekä ikääntyvä negatiivinen kontrolli että huijauskontrolliryhmät saivat täsmälleen saman kirurgisen toimenpiteen, mutta ilman mitään tutkimushoitoa. 42 päivän kuluttua hoidon, kaikki eläimet olivat lopetettiin ja ihon haavat verrattiin histologia, mittaus vesipitoisuus, hydroksiproliini sisältöä, ja kvantitatiivinen real-time PCR-testaukseen.

2, 2. Histopatologia

Ihon paksuus mitattiin SimplePCI Kuva-analyysi-ohjelmisto (Hamamatsu Oyj, Boston, MA) kohdissa värjätään Hematoksyliini-ja eosiini., Orvaskeden paksuus mitattiin alkaen sarveiskerroksen (SC) pinta pohja ihon pötsinystyt, kun ihon paksuus mitattiin ylhäältä pötsinystyt syvin osia reticular dermis, kunnes rasvakudos tai lihas oli saavutettu. Saman suurennus, 5 yksittäiset kannat olivat satunnaisesti valittu mitata ihon paksuus kustakin 5 näkökentät per jakso. Kanssa Masson Trichrome tahra kaikki osat, 5 eri aloilla mieltä olivat myös satunnaisesti valittu ja analysoitu kollageenin kuitujen tiheys.

2, 3., Mittaus vesipitoisuus

1 cm2 ihon haava oli korjattu ja mitataan tarkka märkä punnitaan, jonka jälkeen paistaminen lämpötilassa 80°C: ssa 12 tuntia ennen mittausta sen kuivapainosta. Ihon vesipitoisuus laskettiin kaavalla vesipitoisuuden prosenttiosuutta = ((märkäpaino − kuivapaino) ÷ märkä paino) x 100%.

2, 4. Mittaus Hydroksiproliini-Sisältöä

Hydroksiproliini sisältöä ihon haavan mitattiin mukaan valmistus on pöytäkirjan kaupallisten määritys sarjat (NANJING JIANCHEN biological engineering Co., LTD, Nanjing, Kiina).

2, 5., Kvantitatiivinen käänteistranskriptio-polymeraasiketjureaktiolla (qRT-PCR)

Ihon haavat olivat homogenoitu vuonna TRIzol1 (Invitrogen) ja kokonais-RNA uutettiin mukaan valmistajan pöytäkirjan. 1 µg kokonais-RNA-määrä oli käänteisesti kopioidaan cDNA käyttää PrimeScript RT Synteesi Järjestelmä (Takara Biotekniikka/Takara Bio, Dalian, Kiina). CDNA-tuotteilla tehtiin erittäin herkkä kvantitatiivinen PCR-menetelmä. Kaikki räätälöidyt alukkeet ja luotaimet validoitiin niiden tehokkuuden varmistamiseksi (kuten taulukossa 2 esitetään)., 10 mL: n reaktioseos sisälsi 2x Power SYBR1 Green PCR Master Mixiä, 10-kertaisesti laimennettua cDNA: ta ja 0,2 mM kutakin primeria. Lämpö-protokolla koostui 10 min polymeraasin aktivointi 95°C, ja sen jälkeen 40 denaturaatio 95°C 30 s, alukkeen 55°C 1 min, ja pidennys 72°C 30 s. MRNA ilmaisun tasot normalisoitiin kuin endogeenisen viite geeni β-toiminta ja esitetty taita muutoksia, jotka on saatu ikääntymisen hallinnan iho näytteitä.,

2.6. Statistical Analysis

Data were expressed as means ± standard deviation (SD). Statistical analysis was performed by one-way analysis of variance (ANOVA) using SPSS17.0 software., Tulosten katsottiin olevan tilastollisesti merkitseviä todennäköisyystasolla .

3. Tulokset

3.1. Histologiset muutokset

ikääntyvä iho osoitti sekä orvaskeden että verinahkan paksuuden vähentyneen verrattuna lumekontrollirottiin. Ikääntymisen, iho vähentää sen määrä solukerrosten, ja ihon kollageenin kuidut kääntyi olla harva, hoikka, tai rikki. Verrattuna ikääntyminen hallita, kuitenkin, nämä histologiset muutokset olivat huomattavasti korjaantua 0,1% DMAE + AA, 0.2% DMAE + AA, ja 0,2% DMAE ryhmät (Luvut 1(a)-1(s)).

kun sitä hoidetaan 0, 1% DMAE + AA: lla tai 0: lla.,2% DMAE + AA, sekä epidermaalinen että ihon paksuus ja kollageenikuidun tiheys olivat merkittävästi koholla verrattuna ikääntymisen verrokkiryhmään. Lisäksi 0.2% DMAE yksin myös merkittävästi lisääntynyt ihon paksuus ja tiheys kollageenin kuitua verrattuna ikääntymisen hallinnassa. Mutta kuitenkin, nämä kolme parametrit kaikki ikääntymisen ryhmät olivat huomattavasti downregulated verrattuna sham kontrolliryhmään (Luvut 2(a) 2(b) ja 2(c)).

3, 2. Vanhenevan ihon vesipitoisuus

vesipitoisuuksissa ei ollut tilastollisesti merkitseviä eroja kaikkien ryhmien välillä (Kuva 2 (d)).,

3.3. Hydroksiproliini Sisältöä Ikääntyvälle Iholle

Hydroksiproliini sisältö oli suuresti lisääntynyt ikääntyminen ihon käsitelty sekä 0.1% DMAE + AA ja 0,2% DMAE + AA monimutkainen, joka osoitti huomattavia eroja verrattuna kaikkien muiden ikääntyminen ryhmiä. Mielenkiintoista, hydroksiproliinipitoisuus 0,2% DMAE + AA-ryhmä saavutti vastaavalla tasolla, että huijausta ohjaus, mutta oli huomattavasti korkeampi kuin kaikki muut 6 ikääntyminen ryhmiä. 0,1%: n DMAE + AA-ja 0,2%: n DMAE + AA-ryhmien välillä ei ollut merkittävää eroa (kuva 2(e)).

3, 4., mRNA Ilmaisun Tyypin I, Tyypin III Prokollageenin, MMP-1 ja TIMP-1 Kohde Geenit

Kollageeni tyyppi I-ilme oli huomattavasti upregulated vastauksena molemmat 0.1% DMAE + AA ja 0,2% DMAE + AA-hoitoja, joka ei osoittanut merkittävää eroa, että huijausta ohjaus. Kuitenkin, mitään muita ikääntymisen ryhmät osoittivat paljon vähemmän ilmaus kollageeni tyyppi I verrattuna sham-ohjaus rotat (Kuva 3(a)). Kun sitä hoidetaan 0,1% DMAE + AA: lla, 0,2% DMAE + AA: lla tai 0: lla.,2% DMAE yksin, transkriptio tasot kollageenin tyypin III olivat huomattavasti koholla ikääntyminen kontrolliryhmään, mutta huomattavasti vähemmän kuin sham-ohjaus (Kuva 3(b)). Mahdollisena avain säädin ihon vanhenemista, MMP-1 viestejä kasvoi vastauksena joko 0.1% DMAE + AA tai 0,2% DMAE + AA-hoitoa, joka osoitti, että tilastollisesti merkitsevä ero, että ikääntymisen hallinnassa, mutta ei huijausta ohjaus rotat (Kuva 3(c)). Sen sijaan TIMP-1: n transkriptiotasot olivat kaikissa vanhenevissa ryhmissä huomattavasti alhaisemmat kuin sham Controlin (kuva 3(d)).,

(a)

(b)

(c)

(d)

(a)
(b)
(c)
(d)

Figure 3

Measurement for collagen metabolism of D-gal induced aging skin after each treatment., Ihon haava käsiteltiin ja analysoitiin ilmaus kollageeni tyyppi I (a), kollageeni tyyppi III (b), MMP-1 (c) ja sen inhibiittori, ja TIMP-1 (d) kvantitatiivisella RT-PCR. Ilmaisun tasot jokaiselle kohdistaminen geeni normalisoitiin endogeenisen viite geeni ja raportoitu suhteelliset arvot (ΔΔCt), jotta niille saadaan ikääntyminen kontrolliryhmään. ja † ilmoitetaan merkittävä ero () verrattuna negatiiviseen kontrolliin (ryhmä 1) ja sham-kontrolliin (ryhmä 8).

4., Keskustelu

pieniannoksisen d-galaktoosin pistäminen rotan iholle voi aiheuttaa muutoksia, jotka muistuttavat nopeutunutta ikääntymistä. Tutkimuksissamme rotan ikääntymismalli osoitti hiusten värimuutoksia, toiminnan vähenemistä ja neurologisia häiriöitä. Histologinen muutoksia D-gal aiheuttama ikääntyminen ihon esitetty ohuempi iho kanssa vähentää solujen kerroksia ja harva, hoikka, tai rikki kollageenin kuituja ihon kerros. Lisäksi, tämä ikääntyvälle iholle tarkoitettu alhaisempi hydroksiproliini sisältöä ja mRNA viestejä tyypin I, tyypin III kollageenin, MMP-1 ja TIMP-1 verrattuna normaaliin ihon kudosta., Kaikki nämä tiedot viittaavat siihen, että injektio 125 mg/kg·d-D-galaktoosi-6 viikkoa on teknisesti mahdollista luoda subakuutti ikääntymisen mallia matkien ihmisen ikääntyminen ihon .

tutkimuksemme osoitti, että coinjection DMAE ja AA lisääntynyt tasot hydroksiproliini sisältöä ja kollageeni tyyppi I ilmaus D-gal aiheuttama ikääntyminen ihon, joka oli suunnilleen samalla tasolla normaalin ihon kudosta, kun sitä annetaan korkea annos 0,2% DMAE + AA-hoitoa. Histologiset muutokset ilmestyi kohonnut orvaskeden ja ihon paksuus ja tiiviisti järjestetty ihon kollageenin kuituja., Lisää kiinnostavaa, Mesoterapia, jonka coinjection DMAE ja AA suuresti kohonnut MMP-1-geenin ilmentymistä ikääntyvälle iholle samantasoiseen normaali rotilla, mutta ei sen inhibiittori TIMP-1 oli huomattavasti downregulated kaikissa ikääntyminen rottia. Nämä tulokset viittaavat siihen, että Mesoterapia, jonka coinjection DMAE ja AA ollut myönteinen asetuksen kollageenin hajoamista korjaus-ja jälleenrakentamiseen ikääntyminen ihon ja hidastaa ikääntymisen prosessia ihoa., Aikaisemmat tutkimukset osoittivat, vähentää kollageenin tuotantoa tyypin I ja lisääntynyt kollageenin tyypin III ja MMP-1-ikääntyminen ihon ; kuitenkin meidän tulokset osoittivat, että mRNA ilmaisun kollageeni tyyppi III: n ja MMP-1 oli paljon vähemmän ikääntymisen hallinnassa kuin normaali rotilla. Voi olla, että kollageenin aineenvaihdunta käy läpi eri tavalla normaalien ihomuutosten välillä ikääntymisen ja D-gal: n aiheuttaman subakuutin ihon vanhenemismallin kanssa. Tutkimuksemme osoitti myös, että injektio DMAE-tai AA-yksin ei ilmennyt mitään vaikutuksia hydroksiproliini sisältöä tai viestejä tyypin I kollageenin ja MMP-1 ikääntyvälle iholle., Nämä tiedot osoittavat, että samanaikainen käyttö DMAE ja AA voi olla ainoa tapa käyttää niiden antiaging toiminta tässä D-gal aiheuttama ikääntyminen iho malli, moduloimalla kollageeni tyyppi I aineenvaihduntaa ja remolding rakenne ikääntyvälle iholle.

Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että viljellyt kani ihon kautta fibroblasteja vastasi DMAE massiivinen vakuolisaation pitoisuus-riippuvaisella tavalla. Iho kani ulkoinen korva oli myös huomattavasti paksuuntunut ja esillä selkeä perinuclear turvotusta osoitus vakuolisaation vastauksena paikallisesti 3% DMAE., Ehdotettiin, että vakuolaarisen solupatologia voi olla erotettavissa oleva parantaa ihon ulkonäköä, joka on nopeasti tuotettu paikallisesti annettuna DMAE ja voisi olla cellular perusteella antiwrinkle vaikutus DMAE . Meidän tulokset, vakuolisaatiota ihon fibroblastien saattaa esiintyä molemmissa on 0,1% ja 0,2% DMAE käsitelty ikääntyvälle iholle, jolloin cellular turvotus ja lisääntynyt kollageenin kuitujen tiheys. Ikääntyvän ihon epiteelisolut saattoivat myös vastata 0,2% DMAE: n suurempaan pitoisuuteen vakuolisaatiolla, joka esitettiin epidermaalisen paksuuden lisääntymisenä., Nämä saattavat kuitenkin tarvita lisätutkimuksia asian selvittämiseksi.

lisäksi, mittaus ihon vesipitoisuus ei osoittanut eroja kaikki saaneilla rotilla, mikä viittaa siihen, että DMAE ja yhdiste AA oli rajallinen vaikutus iholle, kosteuttava. Tämä saattaa johtua siitä, että pienempi pitoisuus ja lyhyempi toiminta-aika paikallista saatavilla DMAE epidermaalinen kerros, kun suora ihonalainen injektio oli käyttää DMAE toimitus, joka poikkeaa paikallisesti DMAE.

5., Päätelmät

D-galaktoosi aiheuttama ikääntyminen malli rotta, Mesoterapia toimittamalla DMAE ja AA suoraan kohdekudokseen on merkitty antiaging vaikutuksia edistämällä kollageenin synteesiä ja hajoamista uudistaa ihon rakennetta ja parantaa paksuus ikääntyvälle iholle. Vaikka näissä kokeissa käytettiin rottamallia, tulokset ovat merkityksellisiä kliinisten tutkimusten kannalta., Lisätutkimuksia ymmärtää mekanismia toiminta dimetyyliaminoetanoli ja yhdiste aminohappo ikääntyminen ihon auttaa kehittää ja testata enemmän voimakas ja tehokas ihonhoito hoito edelleen ihmisten arviointi.

eturistiriita

kirjoittajat julistaa, että ei ole eturistiriitoja koskevat julkaisemisesta tämän kirjan.