A Dimetilaminoetanol és az összetett aminosav hatása a patkány D-galaktóz által kiváltott bőr öregedési modelljére
absztrakt
az emberi lények tartós álma az öregedés visszafordítása vagy elhalasztása. Ebben a vizsgálatban a mezoterápiában alkalmazott dimetilaminoetanolt (DMAE) és összetett aminosavat (AA) vizsgálták a D-galaktóz által kiváltott öregedő bőrre gyakorolt potenciális antiaging hatásuk miatt. A D-gal indukciót követő 18 napon belül minden patkányt sóoldat intradermális mikroinjekciójával, AA-val, 0,1% DMAE-vel, 0,2% DMAE-vel, 0,1% DMAE + AA-val vagy 0,2% DMAE + AA-val kezeltek., A kezelést követő 42 napon belül a bőr sebét betakarították és megvizsgálták. Az epidermális és dermális vastagság mérése 0,1% DMAE + AA és 0,2% DMAE + AA csoportban szignifikánsan vastagabb volt, mint az öregedésgátló patkányoknál. Nem találtak különbséget a szövetek víztartalmában a csoportok között. A hidroxiprolin 0,1% DMAE + AA-ban, 0,2% DMAE + AA-ban, a hamis kontrollcsoportok pedig sokkal magasabbak voltak, mint az összes többi csoport. Az I. típusú, III.típusú és MMP-1-es kollagén expresszió mind a 0,1% – os DMAE + AA, mind a 0,2% – os DMAE + AA csoportokban erősen szabályozható volt az öregedésszabályozáshoz képest., Ezzel szemben a különböző öregedési csoportok TIMP-1 expressziós szintje jelentősen csökkent a hamis kontrollhoz képest. A DMAE és az AA célszövetbe történő beemelése jelentős antiaging hatást gyakorolt a patkányok d-galaktóz által kiváltott bőr öregedési modelljére.
1. Bevezetés
az Antiaging az ember örök témája és álma., Az életkorral összefüggő bőrelváltozások elkerülhetetlenek, beleértve a bőr elvékonyodását, megereszkedését, ráncosodását, a rugalmasság elvesztését, a szárazság területeit, valamint az I/III típusú kollagén Arány inverz forgalmát a bőrben, amely az I. típusú kollagén szintézise csökkent, de a III .típusú kollagén fokozatos termelése. Jelenleg mezoterápia már felkeltette mindenki érdeke, mint egy antiaging stratégia., Ez egy minimálisan invazív eljárás, amely farmakológiai anyagok, például tápanyagok, hormonok, vitaminok, enzimek és egyéb reagensek intradermális mikroinjekciójából áll, amelyeket hígítottak és közvetlenül a kezelendő régióba adnak be. Steril és professzionális manipuláció esetén a mezoterápia nagyon ritkán okoz bőrfertőzést és nekrózist, kivéve néhány kisebb kockázatot, például duzzanatot és fájdalmat az injekció beadása során., Mint biztonságos, egyszerű, kevésbé fájdalmas eljárás, amely az úgynevezett “ebédidő kozmetikai eljárások” egyike, nem igényel helyreállítási időt, tökéletes szakemberek és sikeres emberek számára a gyors tempójú modern életben .
A Dimetilaminoetanol (DMAE), a B-vitamin kolin analógja és az acetilkolin prekurzora, ma izgalmas új bőrápoló kiegészítőként kap nagyobb figyelmet az antiaging, az antiwrinkle és a bőr szilárdságának akut hatásaira. A DMAE jól ismert külső alkalmazásra., A randomizált klinikai vizsgálatokban a DMAE arcgél 3% – a biztonságosnak és hatékonynak bizonyult a homlok vonalak és a periorbitális finom ráncok enyhítésében, valamint az ajak teljességének és alakjának javításában, valamint az arcbőr általános megjelenésében . A vizsgálat nyílt kiterjesztése azt is kimutatta, hogy a DMAE gél hosszú távú alkalmazása legfeljebb 1 évig jó biztonsági profillal járt., Azonban trópusi kezelés DMAE általában megköveteli a magas dózis, koncentráció át epidermális permeabilitás akadály, amely merülnek fel aggályok a toxicitás, a mellékhatások, valamint az orvosi költségeket. Azt jelentették, hogy a 2,5–10 mmol/mL DMAE in vitro tenyésztett humán fibroblaszt sejtek vacuoláris citopatológiáját okozhatja. Ezenkívül a vizsgálatok azt mutatták, hogy a 3% DMAE gél tropikusan történő alkalmazása a nyúlfül epidermális sejtjeinek vacuoláris citopatológiáját is magában foglalhatja. A DMAE alternatív szállítása szükséges az öregedő bőr javításának relatív hatékonyságának értékeléséhez.,
a lokalizált mikroinjekcióval (mezoterápia) intradermálisan alkalmazott alacsony dózisú DMAE potenciális antiaging hatásainak értékelése érdekében a D-gal által indukált öregedő bőr szövetszerkezetét és kollagén metabolizmusát mérték ebben a vizsgálatban. Eközben tanulmányozták az összetett aminosav (AA) coinjection-t is, amely DMAE injekcióval csökkenti a sejtek toxicitását, és helyi tápanyag-ellátást eredményez. A bőrben figyelembe vett hatásmechanizmusukat is leírták.
2. Anyagok és módszerek
2.1., Állatok
hím Wistar patkányok vásároltak Institute of pharmaceutical Sciences (Qingdao, Kína). Minden állat súlyozott 180-220 g a műtét idején. Az állatgondozási és kísérleti protokollt a Qingdao University Medical School intézményi állatgondozási és használati Bizottsága hagyta jóvá.
összesen 80 Wistar patkányt véletlenszerűen osztottak fel minden kísérleti csoportra (az 1.táblázatban részletezettek szerint)., Állatok minden kezelés csoport, kivéve a sham kontroll csoport, kaptak, subcutan injekció formájában, a D-galaktóz (D-gal), az adag 125 mg/kg·d 6 hétig, hogy rábírja a bőr öregedési modell patkány. A D-gal injekció beadását követő 18 napon belül minden patkányt klórhidráttal (0,25 mL / 100 g testtömeg) érzéstelenítettek, és a csípő területén fertőtlenítettek. A patkány csípőjének mindkét oldalán egy 3 cm-es kerek tetoválási területet előregyártottak, majd hetente egyszer általános érzéstelenítéssel kezelték 4 héten keresztül a sóoldat (ns), AA, 0,1% DMAE, 0,2% DMAE, 0,1% DMAE + AA vagy 0 intradermális mikroinjekciójával.,2% DMAE + AA, ill. Mind az öregedő negatív kontroll, mind a hamis kontrollcsoportok pontosan ugyanazt a sebészeti beavatkozást kapták, de vizsgálat alatt álló kezelés nélkül. A kezelést követő 42 napon belül minden állatot eutanizáltak, és a bőr sebeit szövettannal, a víztartalom mérésével, a hidroxiprolin-tartalommal és a Kvantitatív, valós idejű PCR-vizsgálattal hasonlították össze.
2.2. A bőr vastagságát a SimplePCI Image analysis software (Hamamatsu Corporation, Boston, MA) segítségével mértük hematoxilinnel és Eosinnal festett szakaszokban., Az epidermális vastagságot a stratum corneum (SC) felületétől a dermális papillae aljáig mértük, míg a bőr vastagságát a papillák tetejétől a retikuláris dermis legmélyebb részéig mértük, amíg a zsírszövet vagy az izom el nem érte. Ugyanezen nagyítás alatt 5 egyedi pozíciót véletlenszerűen választottak ki a bőr vastagságának mérésére az egyes szakaszonként 5 látómezőből. A Masson Trichrome folt minden szakasz, 5 különböző látómezőket is véletlenszerűen kiválasztott és elemzett kollagén rost sűrűsége.
2.3., A víztartalom mérése
1 cm2 a bőr sebét betakarították, és a pontos nedves méréshez mérték, majd 12 órán keresztül 80°C-on sütötték, mielőtt száraz tömegét megmérték. A bőr víztartalmát a víztartalom százalékának képletével számítottuk ki = ((nedves tömeg − száraz tömeg) ÷ nedves tömeg) × 100%.
2.4. A hidroxiprolin tartalom mérése
a bőr sebének Hidroxiprolintartalmát a kereskedelmi vizsgálati készletek gyártási protokollja (NANJING JIANCHEN biological engineering Co., LTD, Nanjing, Kína).
2, 5., Kvantitatív reverz transzkripció-polimeráz láncreakció (qRT-PCR)
a bőr sebeit trizol1-ben (Invitrogén) homogenizálták, és a teljes RNS-t a gyártó protokollja szerint extrahálták. Az 1 µg teljes RNS-t a PrimeScript RT szintézis rendszer (Takara Biotechnology/Takara Bio, Dalian, Kína) segítségével fordítottan átírták cDNA-ra. Ezekkel a cDNA termékekkel rendkívül érzékeny kvantitatív PCR módszert végeztünk. Minden egyedi alapozót és szondát hitelesítettek hatékonyságuk érdekében (a 2.táblázat szerint)., A 10 mL-es reakciókeverék 2x Power SYBR1 Green PCR Master mixet, 10-szeres hígított cDNA-t és 0,2 mM-es alapozót tartalmazott. A termikus jegyzőkönyv állt, 10 perc polimeráz aktiválás 95°C-on, majd 40 ciklus denaturáció: 95°C-on 30 s, alapozó lágyítás 55°C 1 min jelent, 72°C-30 s. A mrns expressziós szintje normalizált, hogy azok az endogén referencia gén β-akció, valamint a bemutatott szeresére változik, hogy azok nyert öregedés ellenőrzési bőr minták.,
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.6. Statistical Analysis
Data were expressed as means ± standard deviation (SD). Statistical analysis was performed by one-way analysis of variance (ANOVA) using SPSS17.0 software., Az eredményeket statisztikailag szignifikánsnak tekintették az valószínűségi szintjén .
3. Eredmények
3.1. Szövettani változások
Az öregedő bőr mind az epidermisz, mind a dermis esetében csökkent vastagságot mutatott a hamis kontroll patkányokhoz képest. Az öregedéssel az epidermisz csökkentette a sejtrétegek számát, a dermális kollagénszálak pedig ritkaak, karcsúak vagy töröttek. Az öregedésszabályozáshoz képest azonban ezek a szövettani változások nagymértékben enyhültek 0,1% DMAE + AA, 0,2% DMAE + AA és 0,2% DMAE csoportokban (1(A)-1(h) ábra).
0, 1% DMAE + AA vagy 0 kezelés esetén.,2% DMAE + AA, mind az epidermális, mind a dermális vastagság, mind a kollagénszál sűrűsége jelentősen emelkedett az öregedési kontrollcsoporthoz képest. Ezenkívül önmagában a 0,2% DMAE jelentősen megnövelte a kollagén rost epidermális vastagságát és sűrűségét az öregedésszabályozáshoz képest. Mindazonáltal ez a három paraméter minden öregedési csoportban jelentősen csökkent a színlelt kontrollcsoportéhoz képest(2.A), 2. b) és 2. C) ábra).
3.2. Az öregedő bőr víztartalma
nem volt statisztikailag szignifikáns különbség a víztartalomban az összes csoport között(2. ábra d)).,
3.3. Az öregedő bőr hidroxiprolin-tartalma
a hidroxiprolin-tartalom jelentősen megnőtt az öregedő bőrben, amelyet mind a 0,1% DMAE + AA, mind a 0,2% DMAE + AA komplex kezelt, ami jelentős különbségeket mutatott az összes többi öregedési csoporthoz képest. Érdekes, hogy a 0,2% DMAE + AA csoportban a hidroxiprolin tartalom egyenértékű szintet ért el a sham control szintjével, de szignifikánsan magasabb volt, mint az összes többi 6 öregedési csoport. Nem volt szignifikáns különbség a 0,1% DMAE + AA és a 0,2% DMAE + AA csoportok között(2.ábra e)).
3.4., az I. típusú, III. típusú prokollagén, MMP-1 és TIMP-1 Célgének mRNS expressziója
Az I. típusú kollagén expressziója nagymértékben módosult mind a 0,1% DMAE + AA, mind a 0,2% DMAE + AA kezelésre adott válaszként, ami nem mutatott szignifikáns különbséget a sham kontrolléhoz képest. Azonban a többi öregedési csoport közül bármelyik sokkal kevésbé mutatta az I. típusú kollagén expresszióját, összehasonlítva a hamis kontroll patkányokkal(3.A) ábra). 0,1% DMAE + AA, 0,2% DMAE + AA vagy 0-val kezelve.,Csak 2% DMAE, a III. típusú kollagén átirat szintje jelentősen emelkedett az öregedési kontrollcsoport felett, de lényegesen kisebb, mint a sham control (3.ábra b))). A bőr öregedésének potenciális kulcsszabályozójaként az MMP-1 üzenetek 0,1% DMAE + AA vagy 0,2% DMAE + AA kezelésre adott válaszként növekedtek, ami statisztikailag szignifikáns különbséget mutatott az aging control, de nem a sham control patkányok esetében (3.ábra c))). Ezzel szemben a TIMP-1 transzkriptszintjei az összes öregedési csoportban szignifikánsan alacsonyabbak voltak a színlelt kontroll szintjénél (3.ábra(d))).,
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
Measurement for collagen metabolism of D-gal induced aging skin after each treatment., A bőr sebét I (A) típusú kollagén, III (B) típusú kollagén, MMP-1 (c) és inhibitora, valamint timp-1 (d) kvantitatív RT-PCR expresszálására dolgozták fel és elemezték. Minden egyes célgén expressziós szintjét endogén referenciagénre normalizálták, és relatív értékként (ΔΔCt) jelentették az öregedési kontrollcsoportból nyert értékekhez. és † jelentős különbséget () jeleznek a negatív kontrollhoz (1.csoport), illetve a hamis kontrollhoz (8. csoport) képest.
4., Vita
az alacsony dózisú D-galaktóz patkány bőrbe történő befecskendezése olyan változásokat idézhet elő, amelyek hasonlítanak a gyorsított öregedésre. Tanulmányaink során a patkány öregedési modellje hajszínváltozásokat, csökkent aktivitást, neurológiai károsodást mutatott. A D-gal által indukált öregedő bőr szövettani változásai vékonyabb epidermiszként jelennek meg, csökkentett sejtrétegekkel, ritka, karcsú vagy törött kollagénszálakkal a bőrrétegben. Továbbá ez az öregedő bőr alacsonyabb hidroxiprolin-tartalmat és mRNS-üzeneteket mutatott az I. típusú, III.típusú kollagén, MMP-1 és TIMP-1 esetében a normál bőrszövethez képest., Mindezek az adatok arra utalnak, hogy a 125 mg/kg·D D-galaktóz injekció 6 hétig technikailag megvalósítható, hogy szubakut öregedési modellt hozzon létre az emberi öregedő bőr utánzására .
vizsgálataink azt mutatták, hogy a DMAE és az AA coinjection növelte a hidroxiprolin-tartalom és a D-gal által indukált öregedő bőr I. típusú kollagén expressziójának szintjét, amely megközelítőleg azonos szintű normál bőrszövetet ért el, ha nagy dózisú, 0, 2% DMAE + AA kezelést kapott. A szövettani változások emelkedett epidermális és dermális vastagságként, valamint szorosan elrendezett dermális kollagénszálakként jelentkeztek., Még érdekesebb, mezoterápia által coinjection a DMAE és AA jelentősen emelkedett MMP-1 gén expresszió öregedő bőr egyenértékű szintű normál patkányok, de nem annak inhibitora TIMP-1, hogy jelentősen csökkent az összes öregedő patkányok. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy mezoterápia által coinjection a DMAE és AA játszott pozitív szabályozás kollagén katabolizmus a javítás és rekonstrukció az öregedő bőr és késlelteti az öregedési folyamatot a bőr., Korábbi vizsgálatok az I. típusú kollagén csökkent termelését, valamint a III. típusú kollagén és az MMP-1 fokozott szintézisét mutatták az öregedő bőrben ; eredményeink azonban azt mutatták, hogy a III.típusú kollagén és az MMP-1 mRNS expressziója sokkal kevésbé volt az öregedésszabályozásban, mint a normál patkányoké. Lehet, hogy a kollagén anyagcsere megy keresztül egy másik módja a normál bőrelváltozások az öregedés, valamint a D-gal-indukált szubakut bőr öregedési modell. Tanulmányunk azt is kimutatta, hogy a DMAE vagy AA injekció önmagában nem mutatott hatást a hidroxiprolin tartalmára vagy az I. típusú kollagénre és az MMP-1-re vonatkozó üzenetekre az öregedő bőrben., Ezek az adatok azt mutatják, hogy a DMAE és az AA együttes alkalmazása lehet az egyetlen módja annak, hogy antiaging hatásukat kifejtsék ebben a D-gal által kiváltott öregedő bőrmodellben, az I. típusú kollagén metabolizmus modulálásával és az öregedő bőr szerkezetének újragondolásával.
korábbi tanulmányok kimutatták,hogy a tenyésztett nyúl dermális fibroblasztok koncentrációfüggő módon reagáltak a DMAE-re. A nyúl külső fülének epidermisze szintén jelentősen megvastagodott, és a 3% – os DMAE helyi alkalmazására adott vakuolizációra utaló tiszta perinukleáris duzzanatot mutatott., Azt javasolták, hogy a vacuoláris citopatológia nem lehet disszociálható a bőr megjelenésének javulásától, amelyet a helyileg alkalmazott DMAE gyorsan termel, és lehet a DMAE antiwrinkle hatásának celluláris alapja . Eredményeink alapján a dermális fibroblaszt vakuolizációja előfordulhat mind a 0,1% – os, mind a 0,2% – os DMAE kezelt öregedő bőrben, ami celluláris duzzanatot és fokozott kollagénrost-sűrűséget eredményez. Az öregedő bőr hámsejtjei is reagálhatnak a 0,2% – os DMAE magasabb koncentrációjára vacuolizációval, amely megnövekedett epidermális vastagságként jelenik meg., Ezekre azonban további vizsgálatokra lehet szükség az ügy tisztázása érdekében.
ezenkívül a bőrvíztartalom mérése nem mutatott különbséget az összes kezelt patkány között, ami arra utal, hogy a DMAE és az AA vegyület korlátozott hatással volt a bőr hidratálására. Ennek oka lehet, hogy az epidermális rétegben a helyi rendelkezésre álló DMAE-k koncentrációjának alacsonyabb szintje és rövidebb hatásideje van, amikor a DMAE beadásához közvetlen szubkután injekciót alkalmaztak, amely eltér a DMAE helyi alkalmazásától.
5., Következtetések
A D-galaktóz által indukált öregedési modell patkány, mezoterápia azáltal DMAE és AA közvetlenül célszövet jelölt antiaging hatások elősegítésével kollagén szintézis és katabolizmus, hogy átalakítsa a bőr textúráját, és javítja a vastagsága öregedő bőr. Bár ezek a kísérletek patkánymodellt alkalmaztak, az eredmények relevánsak a klinikai munkákhoz., További vizsgálatok, hogy megértsék a mechanizmus, a keresetet a dimethylaminoethanol vagy összetett aminosav öregedő bőr segíti a fejlesztési vizsgálat a nagyobb teljesítményű, hatékony bőrápoló kezelések további emberi értékelés.
összeférhetetlenség
a szerzők kijelentik, hogy nincs összeférhetetlenség a cikk közzétételével kapcsolatban.