Promega Connections (Magyar)
szomorúsággal ismerjük fel Dr. Frederick Sanger elhaladását. Sanger ismert molekuláris biológusok és biokémikusok világszerte az ő DNS szekvenálás technika, amely elnyerte az 1980-as kémiai Nobel-díjat.
szintén figyelemre méltó, hogy Sanger laboratóriuma elvégezte az első teljes genomszekvenciát,a vírus DNS-genomjának több mint 5000 bázispárját.
Az 1980-as díj Sanger második Nobel-díja volt, amelyet először 1958-ban ítéltek oda a fehérjék kémiai szerkezetének meghatározásáért., Ebben a munkában Sanger nemcsak az inzulint tartalmazó aminosavakat, hanem az aminosavak sorrendjét is tisztázta.
a Sanger Szekvenálásról
a Sanger DNS szekvenálás a szekvenálás láncvégződési módjaként is ismert. A Sanger technika a reakcióban a tipikus deoxinukleotidok (dNTPs) mellett dideoxinukleotidokat vagy ddNTP-ket is alkalmaz. a ddNTPs a DNS-szál megszüntetését eredményezi, mivel a ddntps nem rendelkezik a nukleotidok közötti foszfodiészterkötéshez szükséges 3′-OH csoporttal. E kötés nélkül a nukleotidok lánca megszűnik.,
a Sanger szekvenáláshoz egyszálú DNS-re, egy DNS-alapozóra (radioizotópos vagy fluoreszcens címkével), DNS-polimerázra, dNTPs-re és ddNTPs-re van szükség. Négy reakció van beállítva, mindegyik nukleotidhoz egy, G, A, T és C. mindegyik reakcióban mind a négy dntp szerepel, de csak egy ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP vagy ddTTP) kerül hozzáadásra. A szekvenálási reakciókat elvégezzük, és a termékeket poliakrilamid gél-elektroforézissel denaturáljuk és méret szerint elválasztjuk.
Ez a reakció mix eredmények különböző hosszúságú darabokat képviselő, például, a helyszín minden Egy nukleotid a sorrend, mert bár több dATP, mint ddATP a reakció, van elég ddATP, hogy minden ATP végül ahelyett, hogy helyébe egy ddATP, ami a lánc megszüntetése. A gélelektroforézissel történő elválasztás feltárja ezeknek a ddATP-tartalmú fragmenseknek a méretét, így az összes nukleotid helyét a szekvenciában. Hasonló információk állnak rendelkezésre a GTP, a CTP és a TTP tekintetében is.,
a Maxam és Gilbert DNS szekvenálási módszer előnye volt a kettős szálú DNS-sel történő alkalmazás idején. Ez a módszer azonban megkövetelte a restrikciós enzimfragmensek DNS-szál elválasztását vagy frakcionálását, ami valamivel időigényesebb technikát eredményezett, összehasonlítva a Sanger et al által közzétett 1977-es módszerrel.
Dr. Sanger Gloucestershire-ben, az Egyesült Királyságban született 1918-ban, orvos fia. Bár kezdetben azt tervezte, hogy követi apját az orvostudományba, a biokémia élethosszig tartó szenvedélyévé és kutatási területévé vált., Sanger 65 évesen vonult vissza, hogy több időt töltsön kertészkedéssel és csónakázással.