Dolly a 20: La storia più famosa del mondo di pecora

Dolly, il primo mammifero clonato da una cellula adulta, è nato il 5 luglio 1996. Ma è stata creata cinque mesi prima, in una piccola stanza al Roslin Institute, fuori Edimburgo, Regno Unito.

Karen Walker, embriologa, PPL Therapeutics: Il giorno in cui abbiamo fatto Dolly, abbiamo avuto una giornata di spazzatura.,

Bill Ritchie, embriologo, Roslin Institute: Era l ‘ 8 febbraio 1996. Ho controllato. Sappiamo che è stata una giornata di spazzatura: abbiamo avuto vari problemi con infezioni e cose.

Walker: È un peccato che l’edificio sia stato demolito, altrimenti si poteva vedere la stanza in cui è stata fatta Dolly. Uso la parola” stanza ” liberamente, perché in realtà era solo un grande armadio, che, quando io e Bill eravamo lì dentro, potevi solo prendere due sedie e l’incubatrice.

Ritchie: Era letteralmente l’armadio. Era l’armadio in fondo al laboratorio., Quando abbiamo ottenuto troupe in seguito, non potevano crederci, non c ” era spazio per sparare.

Walker e Ritchie facevano parte di un progetto del Roslin Institute e dello spin-off PPL Therapeutics, con l’obiettivo di apportare precise modifiche genetiche agli animali da allevamento., Il team scientifico, guidato dall’embriologo Roslin Ian Wilmut, ha ragionato che il modo migliore per apportare questi cambiamenti sarebbe quello di modificare il genoma di una cellula in coltura e quindi trasferire il nucleo in una nuova cellula.

Ritchie: Il modo più semplice per descrivere il trasferimento nucleare è che si prende un ovocita, un uovo non fecondato, e si rimuovono i cromosomi. Quindi prendi una cellula completa che contiene cromosomi sia maschili che femminili — tutte le nostre cellule lo fanno, a parte le gonadi., Prendi quella cellula e la fuse nell’uovo enucleato, la attivi — che inizia a crescere — e la trasferisci a una madre surrogata. Fiduciosamente, con le dita incrociate, si otterrà una prole clonato, una copia dell”animale che hai preso quella cella da.

Walker: Noioso è assolutamente la parola. Sei seduto, guardando un microscopio e hai entrambe le mani sui micromanipolatori. E “un po” come i joystick bambini usano al giorno d ” oggi sui giochi. Se ti scivolasse il gomito, potresti pulire tutto il piatto.,

Un anno prima, il team aveva prodotto pecore gemelle, chiamate Megan e Morag, clonando cellule embrionali coltivate in uno sforzo guidato dal biologo dello sviluppo Roslin Keith Campbell. Ma in questo giorno di febbraio 1996, i problemi con le linee cellulari fetali che avevano pianificato di utilizzare significavano che avrebbero avuto bisogno di un altro donatore nucleare.

Walker: Il mio ricordo è di sbattere come un pollo, pensando: “Cosa ci metteremo?”perché le cellule che stavamo per usare non ci sono. L”ultima cosa che vuoi fare è sprecare quegli ovociti che hai. Volevamo provare qualcosa, almeno.,

Angela Scott, cell-culture technician, PPL: Ho ricevuto notizie da Karen per dire che le cellule che si aspettavano erano state contaminate. Mi hanno chiesto se avevo delle cellule che potevano usare. Le cellule che avevo erano cellule epiteliali mammarie ovine: stavamo cercando di aumentare l’espressione delle proteine nel latte. Queste erano cellule adulte.

Alan Colman, direttore della ricerca, PPL: Provenivo da un background di trasferimento nucleare con John Gurdon . Non sarebbe mai stato in grado di ottenere una rana adulta utilizzando il trasferimento nucleare da un donatore di cellule adulte., Era stato in grado di ottenere girini utilizzando cellule adulte, ma non era mai stato in grado di ottenere una rana adulta. Non pensavo che avrebbe funzionato con le cellule adulte a tutti. Ma non avevamo altra linea cellulare per andare con, così abbiamo tutti d”accordo che avremmo usare queste cellule della ghiandola mammaria e solo vedere cosa è successo, acquisire una certa esperienza. Questi erano da una pecora di 6 anni-di mezza età per una pecora.

Ian Wilmut, embriologo, Roslin: Questo è qualcosa che è sbagliato fino ad oggi. Dolly è descritto come il primo mammifero clonato da una cellula adulta. Lei è in realtà il primo clone adulto, periodo. Lei è spesso undersold.,

Anche se le mucche clonate e transgeniche sarebbero più preziose per l’industria, il team Roslin ha lavorato con le pecore per motivi pratici.

Wilmut: I bovini sono incredibilmente costosi e hanno un lungo intervallo di generazione. Le pecore sono molto meno costose e molto più facili da lavorare. E conoscevamo la biologia riproduttiva. Era molto probabile che se avessimo potuto far funzionare qualcosa nelle pecore, avrebbe funzionato nelle mucche. Le pecore sono piccole mucche economiche.

John Bracken, farm research assistant, Roslin: Ci sarebbero 40-60 animali che subiscono un intervento chirurgico ogni settimana durante la stagione riproduttiva., E ” un sacco di pecore diverse nel sistema, e che doveva essere molto accuratamente monitorati in modo che gli animali erano al posto giusto al momento giusto.

Walker: Bill teneva gli embrioni e gli ovociti — quando li stava riportando dalla fattoria — nella tasca della camicia. Non ho avuto una tasca superiore della camicia, così ho usato per infilare dentro il mio reggiseno. Era un modo per tenerli al caldo e riportarli in laboratorio e portarli in un ambiente controllato adeguato. Non credo che all”interno del mio reggiseno era terribilmente controllato, ma né era tasca della camicia superiore di Bill.,

Ritchie: Il giorno in cui abbiamo fatto Dolly, avrei fatto l’enucleazione, e lei avrebbe fatto la fusione. Era il nostro modo normale di fare le cose.

Walker: Ho fatto la fusione il giorno in cui abbiamo fatto Dolly. Bill ed io scherzo, che lui è la mamma e io sono il papà perché, essenzialmente, ero la mimica a ciò che lo sperma farebbe.

Hanno trasferito 277 nuclei dalla linea cellulare mammaria — da una razza dalla faccia bianca conosciuta come Finn Dorset-in uova della razza scozzese hardy blackface. Solo 29 degli embrioni risultanti sono stati impiantati in pecore surrogate. Le aspettative erano basse: sembrava quasi impossibile che un nucleo di cellule adulte potesse essere riprogrammato per dare origine a un animale vivo. La maggior parte degli embrioni clonati abortiti, molti anche prima che una gravidanza potesse essere determinata con gli ultrasuoni.

Wilmut: La stagione di allevamento delle pecore inizia a ottobre e termina a febbraio, marzo-ish., A Natale, avevamo stabilito gravidanze dopo il trasferimento da cellule fetali, quindi stava andando bene. Se non lo avessimo fatto, probabilmente non avremmo giocato a lavorare con quello che è diventato Dolly, le cellule mammarie.

Angelika Schnieke, biologa molecolare, PPL: Ricordo di aver incontrato Ian Wilmut in mensa, ed era molto scettico. Egli ha detto:”Sarei sorpreso se funziona, ma PPL sta pagando per gli esperimenti, così li stiamo facendo.”

Bracken: Abbiamo scansionato tutti i riceventi a cui erano stati trasferiti gli embrioni e sapevamo che erano pecore importanti., Ogni giorno che gli scienziati sapevano che stavamo scansionando, sarebbero stati molto desiderosi di sapere se ci fossero state gravidanze.

Walker: Non sono andato giù a guardare tutte le scansioni. Ma con Dolly-perché sapevamo che quelle erano celle che Bill e io avevamo inserito — ero andato giù in quel particolare giorno con John.

Bracken: Ero davvero contento che fosse una gravidanza. Non mi rendevo conto della reale importanza di esso, perché non eravamo davvero detto. Sapevamo solo che era una gravidanza importante. Non ha portato lo stesso peso. Non pensavamo, “Wow!, Se questo progredisce ad un agnello vivo, questo sta per essere un battitore mondo, o sta per trasformare la comprensione scientifica sulla sua testa.”

Walker: Avrei fatto un video vuoto con me, in modo da poter mostrare ai miei colleghi. Quel video è seduto nel mio loft, e per la mia vergogna, non l’ho mai ancora trasferito su DVD. Dovrei.

Schnieke: Ricordo il giorno in cui abbiamo avuto la prima scansione. Lo chiedevamo sempre. E poi abbiamo visto la foto e le scansioni. Allora devi solo sperare che duri e vada fino in fondo.,

Wilmut: La mia memoria è che stavano guardando intorno al giorno 30 o 35, quindi ci sono altri 120 giorni , dove continui a sospirare di sollievo e sperare.

Solo alcuni dei membri del team hanno assistito alla sua nascita.

Bracken: È successo verso le 4:30 del pomeriggio. Non appena è entrata in travaglio, abbiamo chiamato il veterinario del cazzo per far uscire uno dei loro veterinari., Anche se Douglas McGavin e io probabilmente avevamo 50 anni di esperienza tra di noi, sarebbe stato inaudito se avessimo deciso di assistere alla nascita e qualcosa fosse andato storto.

Ritchie: Sapevamo che Dolly stava per nascere, e penso che stesse mostrando segni di avvicinarsi al parto, ed ecco che ho attraversato e c’erano pezzi di Dolly che stava nascendo. C’era un veterinario lì, così si assicurò che l’animale stesse bene e tirò fuori l’agnello.

Bracken: Era assolutamente normale. Nessuna complicazione di sorta. Era un agnello molto vitale., Ha ottenuto sui suoi piedi molto rapidamente, probabilmente entro la prima mezz’ora, che è davvero una buona indicazione che le cose sono normali.

Ritchie: Penso che stavo saltando su e giù quando ho visto quella faccia bianca.

Scott: Karen era via a un matrimonio in quel momento.

Walker: Le avevo dato il numero di fax dell’hotel. Avrei voluto tenere quel fax. Diceva: “Ha la faccia bianca e le gambe pelose.”

Scott: Non so cosa devono aver pensato in hotel: “Wow, questo è un bambino davvero insolito.”

Wilmut: Ero nell’assegnazione. Ho avuto una telefonata per dire che avevamo un agnello vivo., Ho emesso un ” istruzione che nessuno dovrebbe essere lì che non doveva essere lì. Molti erano curiosi. Ho obbedito alla mia regola perché non avevo nulla da contribuire.

Bracken: Sono in piedi accanto a Douglas McGavin guardando il veterinario assistere a questa nascita, e ho fatto un’osservazione a Douglas. Ho detto, ” Sai come dobbiamo chiamare questo agnello? Stiamo andando ad avere a chiamarlo Dolly”, dopo Dolly Parton, perché le cellule sono derivate dal tessuto mammario.

Wilmut: Essendo un po ‘puritano, avrei potuto essere un po’ preoccupato. Con il senno di poi, senza dubbio è stato un grande nome.,

Bracken: Questo è sentito dire. Non me l’hanno mai detto direttamente. Ma ho sentito che avevano contattato Dolly Parton e ha detto:”Abbiamo ottenuto questa pecora clonata che prende il nome da te.”

Wilmut: Non so come è arrivato il messaggio, ma ci è stato detto che il suo agente aveva detto: “Non c’era pubblicità baaad.” Non so se è vero.

Nei prossimi mesi, il team di Wilmut ha confermato che Dolly era un clone della linea cellulare mammaria e ha scritto i risultati. La sua nascita doveva essere tenuta top secret, fino a quando il documento Nature che descrive l’esperimento potrebbe essere pubblicato nel febbraio 1997 (I., Wilmut et al. Natura 385, 810-813; 1997).

Harry Griffin, direttore scientifico, Roslin: Due o tre mesi prima della pubblicazione del documento, ho avuto modo di saperlo. In termini di preparazione, sono stati coinvolti i PPL. L’hanno vista come un’opportunità per farsi pubblicità. Abbiamo lavorato con la loro società di pubbliche relazioni, De Facto. Abbiamo fatto un bel po ‘ di preparazione.,

Wilmut: Ron James, che era l’amministratore delegato di PPL therapeutics, e io siamo stati citati come i principali portavoce e dato un po ‘ di formazione da ex-BBC persone, che prima di tutto si avvicinò e abbastanza aggressivo bloccato microfoni su per il naso e ha chiesto domande aggressive, e successivamente lo ha fatto molto delicatamente. Non siamo stati avvicinati in nessuna parte vicino al modo aggressivo hanno cercato prima, che era abbastanza scioccante. Sono sicuro che valeva la pena avere.

Griffin: Avevamo tutto organizzato., Le chiamate sarebbero dirette a De Facto e avrebbero cercato di organizzare una certa coerenza nella nostra risposta in termini di chi ha ottenuto la priorità e chi no. Tutto questo sarebbe culminato, speravamo, il giovedì che il giornale è uscito. Cos’era, il 27 febbraio? Chiaramente, non lo ha fatto.

Wilmut: Robin McKie all’Observer lo ha fatto trapelare. Negherà l’accusa.

Robin McKie, editor di scienza e tecnologia, The Observer, Londra: Non ho visto quella roba in natura. Non lo biasimo per essere arrabbiato, ma sono andato a grandi dolori per evitare le cose che mi avrebbe portato ad essere accusato di questo., Avevo aiutato un paio di ragazzi che stavano facendo un programma televisivo sulla genetica, e hanno detto, ” Oh, a proposito, hanno clonato una pecora a Edimburgo.” Non ho creduto loro, ma ho telefonato alcune persone sul campo, e uno di loro in America lo ha confermato. Ma ero molto, molto preoccupato. Stavo dicendo qualcosa di abbastanza sensazionale, con assolutamente nessuna prova cartacea di tutto ciò che era successo. Ho detto al mio vicedirettore tutto quello che sapevo, e me l’ha fatto scrivere. Poi la merda ha colpito il ventilatore.,

Griffin: Ian mi ha chiamato e ha detto che era stato appena chiamato e ha detto che L’Observer avrebbe pubblicato la storia la domenica prima della pubblicazione su Nature.

Ian e io siamo entrati nell’istituto verso le 9 di domenica, non sapendo se le persone potevano passare o meno. Il telefono squillò continuamente. Abbiamo avuto una circostanza bizzarra in cui un telefono ha iniziato a squillare in un armadio di pulizia. Quando ho risposto, è stato, credo, il Daily Mirror, che aveva in qualche modo ottenuto questa particolare connessione. Verso le nove e mezza di notte, siamo andati a casa.,

Jim McWhir, scienziato delle cellule staminali, Roslin: Ricordo di essere arrivato il giorno dopo la rottura dell’embargo e c’erano diversi furgoni satellitari nel parcheggio.

Wilmut: C’erano camion televisivi ovunque. Sono andato a parlare su Good Morning America.

Griffin: CBS, NBC, ABC, BBC, tutti lì che vogliono interviste con Ian, che vogliono vedere le pecore. Era il caos. Non credo che si può mai apprezzare l”intensità dei media in pieno volo a meno che non hai sperimentato da soli.

McWhir: Era solo pandemonio. Scendendo alla grande unità animale, era solo una foresta di lampadine flash e giornalisti. E ‘ stato fantastico. Mi sono appena girato e sono tornato al lavoro.

Griffin: La mia segretaria avrebbe messo giù il telefono, e stava squillando immediatamente. Uno dei nomi che ho sentito nominare era Harold Shapiro . Ha detto, ” Ian Wilmut non può parlare con te ora, può richiamare più tardi?,”Bill Clinton gli aveva chiesto di riferire entro 90 giorni sulle implicazioni etiche della clonazione. Ho sentito il suo nome, e ha detto, ” No, abbiamo sicuramente vogliamo parlare con lui.”

Colman: Quando sei incorporato in un progetto, hai quelle che consideri buone ragioni scientifiche per farlo. Tutto quello che abbiamo fatto è stato coperto da un comitato etico. Eravamo stati attraverso un sacco di preoccupazioni per la salute degli animali. La nostra preoccupazione era più su quel tipo di reazione. Non lo stavamo facendo come preludio alla clonazione umana.

Griffin: Le persone nei media hanno premuto ripetutamente questo punto., Siamo stati accusati di mantenere segreto nascita di Dolly perché stavamo contemplando la clonazione di un essere umano. Abbiamo avuto la nostra posizione chiara su questo: non era etico e non sicuro.

Wilmut: Va con il lavoro. Devi solo spiegare che questo non è il caso.

Schnieke: In Europa, è stato immediatamente visto come un negativo. “Cosa hanno fatto ora e cosa potrebbero fare dopo?”Abbiamo avuto la polizia presso l”istituto che ha spiegato cosa si fa se c” è uno spavento bomba. I pacchi venivano controllati per trovare esplosivi.,

Walker: Mi ricordo assistente personale di Ian Wilmut, Jackie, ricevendo telefonate dopo che tutto ha colpito la stampa. Ha avuto un sacco di telefonate, alcune delle quali erano un po ‘ pazzo, da parte di persone che vogliono i loro cani clonati. Quelli più tristi erano quelle persone che avevano perso figli o che avevano avuto malattie stesse, e questa sarebbe stata una svolta che avrebbe potuto curare diverse malattie.

Colman: Dolly sembrava catturare l’immaginazione. Era un animale peloso. Avere un nome che era identificabile aiutato enormemente.,

Bracken: Se fosse stata vista come un animale rinchiuso, che non molte persone hanno visto, avrebbe potuto perpetuare più cattiva pubblicità. Ma penso che, a causa dell’apertura, che alla gente fosse permesso di andare a trovarla e farsi vedere in giro, questo abbia aiutato l’accettazione del pubblico.

Griffin: Si è comportata bene per la macchina fotografica, e tutti potevano vedere che era un animale perfettamente normale. Poiché era accessibile e fotogenica, divenne la pecora più famosa del mondo. Qualsiasi responsabile marketing avrebbe ucciso per questo., In alcune delle immagini è come se lei sta intervistando i media.

Walker: Ho portato un fotografo a vedere Dolly. Questo ragazzo ha prodotto una corona di festa per bambini, una piccola cosa d ” oro. Ho detto: “Non credo che dovremmo.”Eravamo tutti molto desiderosi di non permettere a Dolly di umanizzarsi. Era una pecora e basta.

Bracken: Lontano dai media e dalle telecamere, abbiamo cercato di trattarla come le altre pecore, non come una sorta di celebrità, che ovviamente è diventata.,

Walker: La prima volta che è stata tosata, hanno preso la lana — di cui ho alcuni, in realtà — per essere lavorata a maglia in un maglione per un’associazione benefica per la fibrosi cistica. L’hai vista al museo? E ” dietro una teca di vetro ora perché la gente continuava a pizzicare pezzi di lana da lei. Almeno ho preso la mia lana mentre era ancora viva.

Dolly ha vissuto per sei anni e mezzo e ha dato alla luce diversi agnelli. Ma nel 2003, ha iniziato a mostrare segni di malattia.

Bracken: Era il giorno di San Valentino. Credo fosse un venerdi’. Sapevamo che c’era il potenziale per sviluppare questa malattia polmonare.,

Griffin: Soffriva di una malattia chiamata jaagsiekte. E ” una malattia dei polmoni e uno o due altre pecore in precedenza era andato giù con esso.

Wilmut: Hanno pensato che avrebbe dovuto essere radiografata alla scuola veterinaria. Erano sorpresi dalle dimensioni del tumore nei polmoni. Abbiamo discusso, in queste circostanze, quanto duramente dovremmo lottare per il suo recupero. Non sarebbe più gentile lasciarla andare? Quindi l’abbiamo eutanasata. Sei responsabile del benessere degli animali del tuo progetto.,

Un decennio dopo, un’altra perdita colpì il team scientifico con la morte di Keith Campbell.

Colman: Keith era la forza trainante. Era la persona che ha fatto l’importante lavoro sperimentale che ha seminato i semi del protocollo che tutti abbiamo usato. Dolly non sarebbe successo senza Keith.

Ritchie: Keith era, suppongo, “insolito” è probabilmente la cosa che diresti di lui. Era piuttosto hippy., Guidava una Volkswagen Beetle, fumava roll-up, aveva i capelli lunghi.

Colman: Non ha avuto un grande rapporto con Ian. Erano personalità molto diverse e spesso discutevano.

Wilmut: Non ricordo le righe. A volte avremmo avuto priorità leggermente diverse.

È sempre molto difficile dividere il riconoscimento. Ciò che è stato, ovviamente, la causa di qualche fastidio e qualche critica è che non ha ottenuto la prima paternità sulla carta Dolly. Ha ottenuto assolutamente tutti gli altri. C’è stato un tempo in cui ha detto che il giornale di Megan e Morag era in realtà più importante di Dolly., Era sicuramente frustrato dal fatto che avessi ottenuto un FRS (Fellow of the Royal Society) e alla fine un cavalierato.

Dopo una disputa interna, Campbell si è ucciso il 5 ottobre 2012.

Colman: Keith era un mio ottimo amico e andavamo in mountain bike in Scozia la sera dopo il lavoro. Ho parlato con lui tre giorni prima che morisse. Ero molto scioccato.

Walker: Mi ha colpito molto duramente, più duramente di quanto avrei immaginato. Non lo vedevo da molti, molti anni. Eravamo così vicini, gruppo stretto al momento. Dovevamo esserlo.,

Colman: Sono andato a un incontro a Parigi lo scorso gennaio, dove hanno avuto un premio postumo. Hanno fatto un sondaggio di paglia su quante persone tra il pubblico erano state aiutate da ciò che Keith aveva fatto, e un numero enorme di persone ha alzato le mani.

Le tecniche sviluppate nella creazione di Dolly sono state utilizzate per copiare bestiame prezioso e creare animali transgenici. Ma nei laboratori biomedici, Dolly ha accennato a un futuro in cui le cellule potrebbero essere riprogrammate in uno stato embrionale e utilizzate per trattare le malattie umane.,

Wilmut: La nascita di Dolly capovolto le regole di sviluppo, e ha fatto un sacco di biologi pensano in modo diverso.

Jeanne Loring, biologa delle cellule staminali, Scripps Research Institute, La Jolla, California: Questo è stato l’inizio della clonazione del bestiame, che in realtà è molto popolare ora. C ” è un valore enorme nel poter migliorare il bestiame, e questo ha dato alla gente un altro strumento.

George Seidel, biologo riproduttivo animale, Colorado State University, Fort Collins: Ci sono tori clonati che producono sperma che viene venduto., C”è un toro Angus chiamato Risposta finale, ha mezzo milione di prole o qualcosa del genere. Quindi il suo clone si chiama Final Answer II, e puoi comprare il suo seme a metà prezzo. Mia moglie ed io abbiamo un ranch di bestiame, quindi usiamo Risposta finale II. Inferno, è la stessa genetica. Ma da un punto di vista teorico, la roba transgenica è davvero molto più importante della semplice creazione di copie. Per fare la nostra prima mucca transgenica, abbiamo creato migliaia di embrioni. E ‘ stato uno sforzo enorme. Un decimo dei soldi, un decimo degli animali è ciò che transgenici e clonazione potrebbero fare per te.,

Robert Lanza, chief scientific officer, Astellas Institute for Regenerative Medicine, Marlborough, Massachusetts: Ero emozionato. Ora possiamo sperare di applicare la stessa tecnica-non tanto per gli animali e l’agricoltura-ma per il trattamento di una lunga lista di malattie umane. Quello che Dolly ha mostrato era l’enorme potere di quella tecnologia e la magia dell’uovo. C’erano fattori nell’uovo che potevano portare le cellule adulte indietro nel tempo e riportarle a uno stato embrionale.

Shinya Yamanaka, scienziato delle cellule staminali, Università di Kyoto, Giappone: La mia risposta iniziale è stata “Wow!, E ” come la fantascienza.”Ma non era qualcosa su cui avevo intenzione di lavorare. A giudicare dalla carta, il processo di clonazione è molto tecnicamente impegnativo. L’anno successivo uscì il primo documento sulle cellule staminali embrionali umane. Questo è quando ho rivalutato Dolly. Ho pensato, almeno in teoria, che dovremmo essere in grado di riprogrammare le cellule somatiche nello stato embrionale in modo da poter produrre cellule staminali simili a ES direttamente dalla pelle o dalle cellule del sangue.

McWhir: Un risultato come Dolly ferma le persone nelle loro tracce, e dicono: “Beh, aspetta. Se avessi detto che è impossibile, che altro sto dicendo è impossibile?,”

Schnieke: Hai alcuni esperimenti in cui fa apparire il tuo battito cardiaco. Dolly lo era.

Ritchie: È un po ‘ come avere figli. Io non ne ho. Forse Dolly è quel tipo di bambino.

Wilmut: Sarebbe sbagliato dire che il mio nome è conosciuto in tutto il mondo — ma Dolly lo è.

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