Promega Connections (Italiano)
È con tristezza che riconosciamo la scomparsa del Dr. Frederick Sanger. Sanger è noto ai biologi molecolari e biochimici di tutto il mondo per la sua tecnica di sequenziamento del DNA, che ha vinto per lui il premio Nobel per la chimica 1980.
Anche degno di nota, il laboratorio di Sanger ha realizzato la prima sequenza completa del genoma, quella di un genoma del DNA virale più di 5.000 coppie di basi di lunghezza.
Il premio 1980 è stato il secondo premio Nobel di Sanger, il suo primo assegnato nel 1958 per determinare la struttura chimica delle proteine., In questo lavoro, Sanger ha chiarito non solo gli amminoacidi che comprendevano l’insulina, ma anche l’ordine in cui si sono verificati gli amminoacidi.
Informazioni sul sequenziamento Sanger
Il sequenziamento del DNA Sanger è noto anche come metodo di terminazione a catena del sequenziamento. La tecnica Sanger utilizza dideossinucleotidi o ddNTPs oltre ai tipici deossinucleotidi (dNTPs) nella reazione. Il risultato di ddNTPs nella conclusione del filamento del DNA perché ddNTPs manca del gruppo 3 ‘ – OH richiesto per formazione del legame del fosfodiestere fra i nucleotidi. Senza questo legame, la catena di nucleotidi che si forma è terminata.,
Il sequenziamento Sanger richiede un DNA a filamento singolo, un primer DNA (radiomarcato o con un tag fluorescente), DNA polimerasi, dNTPs e ddNTPs. Vengono impostate quattro reazioni, una per ogni nucleotide, G, A, T e C. In ogni reazione sono inclusi tutti e quattro i DNTP, ma viene aggiunto solo un ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP o ddTTP). Le reazioni di sequenziamento vengono eseguite e i prodotti denaturati e separati per dimensione utilizzando elettroforesi su gel di poliacrilammide.
Questo mix di reazione risultati in diverse lunghezze dei frammenti che rappresentano, per esempio, la posizione di ogni nucleotide nella sequenza, perché mentre c’è più dATP che ddATP nella reazione, c’è abbastanza ddATP che ogni ATP, in definitiva, invece, è sostituito con un ddATP, con conseguente interruzione della catena. La separazione mediante elettroforesi su gel rivela la dimensione di questi frammenti contenenti ddATP e quindi le posizioni di tutti I nucleotidi nella sequenza. Informazioni simili sono fornite per GTP, CTP e TTP.,
Il metodo di sequenziamento del DNA Maxam e Gilbert aveva il vantaggio al momento di essere utilizzato con DNA a doppio filamento. Tuttavia, questo metodo richiedeva la separazione del filamento di DNA o il frazionamento dei frammenti dell’enzima di restrizione, risultando in una tecnica un po ‘ più dispendiosa in termini di tempo, rispetto al metodo del 1977 pubblicato da Sanger et al.
Il Dr. Sanger nacque nel Gloucestershire, Regno Unito, nel 1918, figlio di un medico. Sebbene inizialmente avesse pianificato di seguire suo padre in medicina, la biochimica divenne la sua passione per tutta la vita e l’area di ricerca., Sanger si ritirò all’età di 65 anni, per trascorrere più tempo negli hobby del giardinaggio e della nautica.