ベルガモット精油の抗不安薬様効果は、ラットにおけるフルマゼニルに鈍感である

概要

不安障害は、最も一般的な精神障害の一つであり、γ-アミノ酪酸a型（GABA-A）受容体複合体に作用するベンゾジアゼピン（BDZs）は、世界で最も一般的な抗不安薬を表す。 しかし、慢性BDZの使用は、いくつかの有害反応を引き起こす。 と伝えられ、アロマセラピーはより安全な管理のためのも安心。, 柑橘類のベルガミアRisso et Poiteauのフルーツから得られるベルガモットの精油(BEO)は、他の精油のような、aromatherapyで広く利用されている圧力誘発の心配の徴候を取り除 興味深いことに、前臨床データは、BEOがベンゾジアゼピンジアゼパムのものと重ね合わせることができない動物行動課題において抗不安様/弛緩作用を誘導することを示している。 Ｇａｂａ作動性伝達の関与をよりよく明らかにするために，ベンゾジアゼピン部位きっ抗薬であるフルマゼニル（ＦＬＺ）による前処理がラットにおけるオープンフィールドタスク（ＯＦＴ）を用いてＢＥＯ効果に及ぼす影響を検討した。, 得られたデータは、FLZがphytocomplexの行動効果に有意に影響しないことを示しています。 これらの結果は、アロマセラピーにおけるその合理的な使用のためのエッセンシャルオイルの神経生物学的プロファイルの特性評価に貢献し、BEOとBDZの行動効果の間の重複の欠如を示している。

1. はじめに

柑橘類の属に属する果物から抽出されたいくつかの精油は、不安、睡眠、気分、および認知障害を治療するためにアロマセラピーに使用 ベルガモットはシトラスaurantium L.とシトラスlimon L.に由来すると仮定されている。, または柑橘類aurantifoliaスイング。 ベルガモットエッセンシャルオイル（BEO）は、イタリア薬局方XII edによると、柑橘類のベルガミアRisso et Poiteauの新鮮な果物の中果皮のepicarpと、部分的には、コールドプレ BEOは、酸化誘導体（リナロールなど）とセスキテルペンおよびモノテルペン炭化水素（リモネンなど）を含む揮発性画分（全体の93-96％）と、ポリメトキシ化フラボン、ワックス、クマリン、ベルガモッチン（5-ゲラニルオキシプソラレン）およびベルガプテン（5-メトキシプソラレン）などのソラレンを含む不揮発性画分（全体の4-7％）からなる。, リモネン、γ-テルピネン、β-ピネンは、リナロール、酢酸リナリルとともに揮発性画分に見られる最も豊富な化合物の一つであり、すべて一緒に>全体の油の90％を構成する。 最後の十年では、preclinical調査はBEOの治療上の使用を支えました。 特に、ベルガモット油は、部分的に細かく生理学的および病理学的条件下でシナプス可塑性を調整する基本的なメカニズムとの干渉から派生する著,、認知症の脳虚血、痛み、および行動および心理的症状。 基礎条件下では、BEOは自由に動くラットの海馬における全身または局所投与後に神経伝達物質機能を有する離散アミノ酸の細胞外レベルを上昇させ さらに、BEOの全身用量は、警報、覚醒、および弛緩の電気皮質学的相関を増加させる。, 警告および弛緩に関連する脳波頻度を修正するBEOの能力は、動物行動課題におけるこの植物複合体の全身または吸入投与後の抗不安-弛緩効果を示すデータをサポートする。 興味深いことに，ＢＥＯの効果とジアゼパム（ＤＺＰ）の効果を比較して議論の余地のある結果が得られた。 実際、SaiyudthongとMarsdenは、フィト複合体の活性成分が抗不安作用を誘導するGABA-A受容体複合体のBDZ部位と相互作用すると推測しているが、最近、BEOの特性がDZPの効果と重ならないことを実証した。, Ｇａｂａ作動性伝達は不安障害の病態生理において重要な役割を果たしているので，ＢＥＯの抗不安様作用に関与するメカニズムに関するより多くの洞察を得るために，ＢＤＺ結合部位におけるきっ抗薬であるフルマゼニルのラットにおけるオープンフィールド試験（ＯＦＴ）におけるＢＥＯによって誘導される行動に及ぼす影響を調べることを目的とした。

2. 材料および方法

2.1., 動物

雄ウィスターラット（250-300g;Charles River、Calco、Italy）は、標準実験室ケージ（40×25×15cm）で一定温度（22±1℃）および相対湿度（50％）で、通常の明暗スケジュール（午前7時から午後7時までのライト）で四つのグループに収容された。 OFT実験の前に、ラットは、食品や水への自由なアクセスと実験室条件への適応の一週間を許可されました。 の欧州共同体理事会指令24十一月1986(86/609/EEC)とL.D.4月2014いいえ., 26はまだ信頼できる結果を発生させる使用される動物の数を最小にするために続かれた。

2.2. マテリアル

2.3. 実験手順

ラットの順化は、実験の日に2時間行った。 動物は慣れを受けた。 ランダムな実験グループを形成した。 ラットは、BEO（500μl/kg）またはホホバ油の腹腔内（i.p.）投与を受けた。 I.P.FLZ(3mg/kg)、OFT中のBDZ効果を元に戻す、またはそのビヒクル(生理食塩水中のトゥイーン)を15分前に前処理として投与した。, 三十分後，ＯＦ試験を用いて行動効果を評価した。 この実験プロトコルは、FLZによる前処理がげっ歯類のOFTにおける異なる天然産物の行動効果を元に戻す文献データに準拠しています。

ラットは、閉回路カメラでテストを記録したので、近くの実験室でスクリーンから観察された。 行動テストは、概日リズムに従って09.00と13.00a.m.の間に実施された。 ビデオ録画は、盲目の（治療に気づいていない）観察者によって以下の検査に供された。, 実験後に動物を安楽死させるためにイソフルランの過剰投与を用いた。 行動室は換気され、アリーナは水で洗浄され、BEOおよび排泄物の残りの臭気の跡を避けるために毎日の会議の後で70%のエタノールときれいにされた。

2.4., オープンフィールドテスト

オープンフィールドテストは、動物の感情状態の指標として考えられており、交差、壁飼育、グルーミング、センター、不動などの明確に定められた行動を簡単かつかなり迅速に評価することができ、中枢神経系（CNS）に作用する薬物のスクリーニングに広く使用されている。 特に、交差および壁の飼育は、それぞれ、歩行活動および探索行動の指標とみなすことができるが、グルーミング、センター、および不動は、恐怖または感情と正の相関性を有する行動である。, ラットは暗いプラスチック円形アリーナ（直径75cm）の中央に20ルクスの光を備えた防音ルームに置かれました。 各行動セッションの持続時間は20分であった。 評価されたパラメータ（5分間隔での一般的な歩行活動（前足と壁の飼育の両方での正方形の限界交差）、不安関連行動（顔と体のグルーミング、頭の洗浄、アリーナの中心で過ごした時間）、および不動）をビデオテープで記録し、分析した（Labehaviour）得点するために分析した。

2.5., 統計

統計分析は、一方向または双方向のANOVAで構成され、続いてGraph Pad®6.0を使用したTukeyの多重比較検定が行われました。 値<0.05は統計的に有意であると考えられました。

3. 結果

双方向ANOVA分析は、交差および壁飼育の頻度に関する治療と時間の違いを示している（表1）。 特に、BEO投与は、CTR群と比較した場合、両方の行動が統計的有意性に達することを減少させる（図1）。, BEOの15分前にFLZの全身投与は、精油で処理されたラットで測定された交差および壁飼育の頻度の減少を変更しない（図1）。

一方向ANOVA分析は、グルーミング、センター、および不動時間の違いも示しています（表2）。 ＢＥＯ対ＣＴＲ群で処置された動物において、毛づくろいについて統計的に有意な減少が観察される。 FLZによる前処理では、この効果を防ぐことはできません（図2）。,

アリーナの真ん中の期間に関して、結果は、BEOの全身投与は、CTR群と比較したときに統計的有意性に達するこの行動を減少させることを示している（図2）。 FLZによる前処理は、BEOのこの効果に影響を与えませんが、中心で費やされる時間の増加に向けてわずかな傾向（）が示されています（図2）。

さらに、BEOで処理された動物は、依然として警戒しているが、対照群に比べて不動の時間が多くなっている（図3）。, 興味深いことに、FLZで前処理した動物では、統計的差は計算されていないが、BEO群で観察される不動性を低下させる傾向が観察される（）（図3）。

研究されたすべてのパラメータについて、対照群におけるFLZによる前処理は、0.1–10mg/kgの広い用量範囲を用いたOFT支持文献データにおける動物

4., Discussion

BEOは、他の精油と同様に、ストレス誘発性不安の症状を最小限に抑えるためにアロマセラピーで広く使用されていますが、基礎となるメカニズムとGaba作動性伝達に対するその干渉は解明されていません。

BEOの投与は、BDZ部位きっ抗薬であるFLZによって有意に相殺されないOFTにおいて抗不安薬様効果を発揮する。 後者の結果は，ＢＥＯの特性がＢｄｚの特性と平行ではないことを確認した。, ここでは、歩行活動と探索行動は、交差および壁飼育頻度によって測定され、beoで処理された動物では、車両群と比較して減少し、FLZで前処理は、植物複合体の影響を防ぐことができなかったことを観察した。 さらに、20分のOFTセッションでは、FLZによる前処理の影響を受けないBEOによるグルーミング行動の減少を測定します。 これらの結果は、ＢＤＺ受容体がＢＥＯのこれらの効果に関与していないことを示している。, FLZによる前処理は、BEOがアリーナの中心で過ごす不動および時間に及ぼす影響、すなわち、行動が恐怖または感情と正の相関を示すことを部分的に防ぐが、これは統計的有意性に達しなかった。 興味深いことに、後者は、これらの行動に対するBEOの影響におけるGABA-A受容体の関与を支持するであろう。 GABA-aの受容器は受容器の活動を間接的に調整し、さまざまで総合的で、自然な混合物のターゲットである内生配位子および複数の異なったallosteric結合部位のためのisosteric場所を含んでいます。, 異なった化学構造および親和性の分子は結合部位に影響を与え、明瞭な病理学の効果を表わします。 特に、いくつかの薬理学的作用は、特定のαサブユニットの変調に起因する可能性がある。 例えば、鎮静および催眠特性はα-1サブユニットを含むGABA-a受容体によって媒介されるが、α-2および/またはα-3サブユニットにおけるGABA-A受容体の正の変調は抗不安効果を示す。,

興味深いことに、我々は以前にBEOの全身投与は、自由に移動するラットの海馬におけるGABAの中等度のリリースを誘導することを示した。 この神経化学的知見は，ここで報告されている不動および中心に対するＦＬＺの影響とともに，フィト複合体に存在する化合物のいくつかがＧＡＢＡ-Ａ受容体媒介伝達を妨げる可能性があるという仮説を支持することができた。 複数の調査はBEOのような精油で現在の単一の揮発混theのanxiolyticそっくりの効果のこのneurotransmissionの介入を調査しました。, 特に、著者らは、化合物の投与経路が、抗不安作用に影響を与えるBDZ部位に対するそれらの作用を調節することができることを示唆している。 例えば、吸入によって投与されるリナロールは、FLZによって防止される抗不安効果を誘発するが、全身投与は抗不安効果を生じない。 さらに、シスとトランス（＋）-リモネンエポキシドの混合物の全身投与は、FLZによる前処理によって防止される抗不安効果を誘導する。 しかしながら、（Ｒ）-（＋）-リモネンを吸入により投与する場合、ｂｄｚ部位ant抗薬によって抗不安効果は遮断されない。,

他の神経伝達物質システムは精油によって引き起こされるanxiolyticそっくりの効果で関係しました。 例えば、レモンオイルの吸入に服従するマウスはdopaminergic、serotonergicおよびGABAergic神経伝達の調節によってantistress効果を示します。 ラベンダーの精油の吸入は前頭前野、線条体および海馬でセロトニン（5-HT）のレベルを増加させるanxiolytic効果を示します。, さらに、WAY100635の5-HTの受容器の反対者は、gaba-aの受容器の反対者の使用が効果に欠けている間、ラベンダーの精油の行為を妨げます。 同様のデータは、Ｇａｌｄｉｎｏ ｅｔ ａｌ． そしてTabari et al. whoは、5-HT1A受容体antagon抗薬ではなく、FLZによって前処理によって打ち消さSpiranthera odoratissimaとローズゼラニウムエッセンシャルオイルの全身注入後の抗不安効果を観察,

全体として、これらのデータは、エッセンシャルオイルの抗不安様効果とBEOの可能性がさらなる調査に値する複数の複雑なメカニズムによって強調される可能性があるという仮説をサポートしています。

5. 結論

BDZsは、不安障害の治療に使用されるよく発達した、一般的に処方された薬物であるが、いくつかの副作用（例えば、嗜眠、めまい、眠気、鎮静、および依存）, 限られたデータが精油のanxiolytic活動の根本的なメカニズムについて利用できるけれども、これらの不利な反作用はaromatherapyの広がりを促した。 我々の研究の結果は、BEOの神経薬理学的プロファイルの特徴付けを深めるために貢献しています。 後者は，このフィトコンプレックスの抗不安様効果がＢｄｚｓのそれらおよびストレス誘発性不安の治療のためのアロマセラピーの使用に重ね合わされないという仮説を支持する。,

データの可用性

この研究の調査結果をサポートするために使用されるデータは、要求に応じて対応する著者から入手できます。

利益相反

著者は、この論文の出版に関して利益相反はないことを宣言している。

謝辞

著者は、巧みな技術サポートのためにGuido Ficoに感謝します。 この作品は、カラブリア大学”exクォータ60％によってサポートされていました。”

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