의 효과 디메틸아미노에탄올 및 합성 아미노산에서 D-갈락토오스 유도 피부 노화의 모델 쥐
추상
지속적인 꿈이 인간의 존재를 반대하거나 연기하는 노화입니다. 이 연구에서,디메틸아미노에탄올(DAME)및 합성 아미노산(AA)에서 요법들에 대해 조사해 그들의 잠재적인 노화방지에 효과 D-갈락토오스 유도 노화 피부입니다. D-gal 유도 후 18 일에,각 래트를 식염수,AA,0.1%DMAE,0.2%DMAE,0.1%DMAE+AA,또는 0.2%DMAE+AA 의 피내 미세 주입으로 각각 처리 하였다., 치료 후 42 일에 피부 상처를 수확하고 분석 하였다. 0.1%DMAE+AA 및 0.2%DMAE+AA 군에서 표피 및 피부 두께의 측정은 노화 대조군 쥐보다 유의하게 두껍게 나타났다. 그룹 간의 조직 물 함량에는 차이가 발견되지 않았다. 0.1%DMAE+AA,0.2%DMAE+AA 및 sham 대조군에서 히드 록시 프롤린은 다른 모든 그룹보다 훨씬 높았다. 콜라겐 타입 I,타입 III 및 MMP-1 발현은 노화 대조군과 비교하여 0.1%DMAE+AA 및 0.2%DMAE+AA 군 모두에서 고도로 상향 조절되었다., 대조적으로,다양한 노화 그룹의 TIMP-1 발현 수준은 sham 대조군과 비교했을 때 유의하게 감소되었다. 표적 조직으로 DMAE 와 AA 의 Coinjection 에는 쥐의 D 갈락토오스에 의하여 유도된 피부 노후화 모형에 대한 현저한 antiaging 효력이 있습니다.
1. 소개
Antiaging 은 인간의 영원한 주제이자 꿈입니다., 연령과 관련된 피부 변경이 불가피함을 숱,처지,주름,탄력의 손실,지역의 건조 및 반전 매출 콜라겐의 유형 I/III 비율에서는 피부로 제공됩 감소 합성 콜라겐의 유형 I 지만 upregulated 생산의 콜라겐 type III. 현재 Mesotherapy 는 antiaging 전략으로 모든 사람의 관심을 불러 일으키고 있습니다., 그것은 최소로 침략적인 절차로 구성되어 피부 microinjection 의 약리학적인 물질이 같은 영양소,호르몬,비타민,효소,그리고 다른 시약되었습니다 희석하고 직접 관리 지역으로 처리한다. 아래에 멸균과 전문적인 조작법은 아주 드물게 일으키는 문제의 피부 감염과 괴를 제외하고,일부는 사소한 같은 위험 통증과 붓기는 동안 주입입니다., 으로 안전하고 간단한 덜 고통스러운 절차는 하나의 소위”점심 시간에 화장용 절차,”그것은 필요 없는 복구 시간과 전문가를 위한 성공적인 사람에서 빠르게 진행됩니다.
디메틸아미노에탄올(DAME),아날로그의 비타민 B 콜린과 전조의 아세틸콜린 받고 있다 더 많은 관심으로 흥미로운 새로운 스킨케어 보충을 위해 오늘 그의 급성 효과 노화 방지,개선,그리고 피부 탄력입니다. DMAE 는 외부 응용 분야에서 사용하기에 잘 알려져 있습니다., 에서 무작위한 임상 연구,3%DAME 얼굴 젤로 표시 되었습니다 안전과 효능에서 완화의 이마 라인과 인해 정밀한 주름,그리고 개선에 입술이 충만과 모양 및 전반적인 모양의 피부를 가지고 있습니다. 재판의 오픈 라벨 확장은 또한 최대 1 년 동안 dmae 겔의 장기 적용이 좋은 안전성 프로파일과 관련이 있음을 보여주었습니다., 그러나,열대과 치료 DAME 일반적으로 필요한 고용량과 집중을 통과 표피 침투성 장벽이 발생할 수 있습 문제의 독성작용,그리고 의료비를 감당할 수 있습니다. 2.5–10mmol/mL DMAE 는 시험 관내 배양 된 인간 섬유 아세포 세포의 진공 세포 병리학을 유발할 수 있다고보고되었다. 더하여,학문은 3%dmae 겔의 신청이 또한 토끼 귀 표피 세포의 진공 세포 병리학을 초래할 수 있었다는 것을 보여주었습니다. Dmae 의 대안 전달은 노화 된 피부의 개선을위한 상대적 효능을 평가하는 데 필요합니다.,
을 평가하기 위해 잠재적인 노화 방지 효과의 낮은 복용량 DAME 관리 intradermally 국 microinjection(Mesotherapy),조직의 구조와 콜라겐의 물질 대사를 D-gal 유도 노화 피부에 측정되었는 본 연구의 대상에서 제외된다. 한편,dmae 주입에 의한 세포 독성 감소 및 국소 영양 공급으로 이어지는 화합물 아미노산(AA)의 coinjection 도 연구되었다. 그들의 고려 된 피부에서의 작용 메커니즘도 기술되었다.
2. 재료 및 방법
2.1., 동물
수컷 Wistar 쥐를 제약 과학 연구소(중국 청도)에서 구입했습니다. 모든 동물은 수술 당시 180-220g 의 가중치를 부여했습니다. 동물 관리 및 실험 프로토콜은 청도 대학 의과 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회의 부속 병원에서 승인되었습니다.
총 80 마리의 Wistar 래트를 무작위로 각 실험군으로 나누었다(표 1 에 자세히 설명되어 있음)., 동물에서 각각 처리 그룹을 제외하고,가짜 컨트롤 그룹,주어진 피하 주사 D-갈락토오스(D-gal)에서의 용량 125mg/kg·d6 주 동안을 유도하는 피부노화 모델의 쥐입니다. D-gal 주사 후 18 일에 각 래트를 chloral hydrate(체중 100g 당 0.25mL)로 마취시키고 고관절 부위 내에서 소독 하였다. 3cm 라운드는 문신이 지역 조립식의 각 측면에 쥐의는 엉덩이고 다 치료에 전신마취 후 4 주 동안 주로 피부 microinjection 의 염(NS),AA,0.1%DAME,0.2%DAME,0.1%DAME+AA,또는 0.,2%dmae+AA,각각. 노화 된 음성 대조군과 가짜 대조군 모두 정확히 동일한 수술 절차를 받았지만 연구중인 치료법은 없었습니다. 42 일에 처리 후에,모든 동물들은 안락사 및 피부에 상처들과 비교하여 조직학,측정의 물 콘텐츠,하이드록시프롤린 콘텐츠 및 정량적 실시간 PCR 테스트합니다.
2.2. 조직 병리학
피부 두께는 Hematoxylin 및 eosin 으로 염색 된 섹션에서 SimplePCI 이미지 분석 소프트웨어(Hamamatsu Corporation,Boston,MA)로 측정 하였다., 표피 두께 측정에서 각 층(SC)표면 아래의 피부 유두는 동안,피부 두께 측정에서의 최고의 용의자를 가장 깊은 부분의 망상 진피까지 지방 조직 또는 근육에 도달했습니다. 아래에 동일한 확대,5 개별 위치를 무작위로 선택된 측정하고 피부 두께서의 각각은 5 개의 필드는 보당 섹션입니다. 모든 섹션의 Masson Trichrome 얼룩으로 5 개의 다른 시야도 무작위로 선택되어 콜라겐 섬유 밀도에 대해 분석되었습니다.
2.3., 측정 물 콘텐츠
1cm2 피부 부상은 수확을 측정 정확한 젖은 무게,다음에는 베이킹에서 80°C12 시간을 측정하기 전에 그것의 건조중량. 피부 물 물 함량=((습윤 중량−건조 중량)÷습윤 중량)×100%의 백분율의 공식에 의해 계산되었다.
2.4. 측정의 하이드 콘텐츠
하이드 콘텐츠에 피부에 부상 측정에 따르면 제조업체의 프로토콜의 상업적 분석 장비(NANJING JIANCHEN 생물학 설계 Co.,주식 회사,난징,중국).
2.5., 정량 역사-중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR)
피부에 상처들에 균질 TRIzol1(Invitrogen)총 RNA 추출에 따르면 제조업체의 프로토콜입니다. 1μg 총 RNA 를 PrimeScript RT 합성 시스템(Takara Biotechnology/Takara Bio,Dalian,China)을 사용하여 cDNA 로 역전사시켰다. 이러한 cDNA 생성물로 매우 민감한 정량적 PCR 방법을 수행 하였다. 모든 맞춤형 프라이머 및 프로브는 효율에 대해 검증되었다(표 2 에 나타낸 바와 같이)., 10mL 반응 믹스에는 2x Power SYBR1Green PCR Master 믹스,10 배 희석 cDNA 및 0.2mM 의 각 프라이머가 포함되었습니다. 열 프로토콜을 구성되어 10 분의 효소 활성화에 95°C,다음 40 주기의 변성에 95°C 이를 위해 30 초,프라이머 annealing55°C for1min,그리고 확장에서 72°C30s. MRNA expression 수준 정규화하는 사람들의 생 참조는 유전자 β-액션으로 제공됩 배를 변경하에서 얻은 노후화제 피부 샘플입니다.,
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2.6. Statistical Analysis
Data were expressed as means ± standard deviation (SD). Statistical analysis was performed by one-way analysis of variance (ANOVA) using SPSS17.0 software., 결과는의 확률 수준에서 통계적으로 유의하게 촬영 하였다.
3. 결과
3.1. 조직학 변경
노화 피부를 보여 줄 간격은 모두에 대한 표피 및 진피에 비교했을 때 가짜 컨트롤 쥐. 노화와 함께,표피 감소의 번호의 세포 레이어 피부 콜라겐 섬유할 수 있게 되었 스파 스,슬,또는 깨졌습니다. 그러나 노화 대조군과 비교했을 때,이러한 조직 학적 변화는 0.1%DMAE+AA,0.2%DMAE+AA 및 0.2%DMAE 군에서 크게 개선되었다(그림 1(a)-1(h)).
0.1%DMAE+AA 또는 0 으로 치료할 때.,2%dmae+aa,교원질 섬유의 표피 그리고 피부 간격 그리고 조밀도 둘 다 나이 드는 대조군의 그들에 두드러지게 상승되었습니다. 또한,0.2%DMAE 단독은 노화 대조군과 비교할 때 콜라겐 섬유의 표피 두께와 밀도를 유의하게 증가시켰다. 그러나 그럼에도 불구하고 모든 노화 그룹에서이 세 가지 매개 변수는 sham 대조군과 비교할 때 크게 하향 조절되었다(그림 2(a),2(b)및 2(c)).
3.2. 물 물 함량 노화 피부
모든 그룹 간의 수분 함량에는 통계적으로 유의 한 차이가 없었다(그림 2(d)).,
3.3. 하이드 콘텐츠에 피부 노화
하이드 콘텐츠들이 크게 증가에 노화 피부 치료와 모두 0.1%DAME+AA0.2%DAME+AA 복잡는 큰 차이가 나타났을 때 모든 다른 사람과 비교되는 노화 그룹이 있습니다. 흥미롭게도,하이드록시프롤린 콘텐츠에 0.2%DAME+AA 그룹에 도달하는 동등한 수준의 그것에 가짜 컨트롤러보다 훨씬 높았 모든 다른 6 개의 노화 그룹이 있습니다. 0.1%DMAE+AA 와 0.2%DMAE+AA 그룹 사이에는 유의 한 차이가 없었다(그림 2(e)).
3.4., mRNA Expression 의 종류 I,종류 III 프로 콜라겐,MMP-1,TIMP1 대상 유전자
콜라겐 유형 나는 식은 것을 찾을 수 upregulated 에 응답하여 모두 0.1%DAME+AA0.2%DAME+AA 트리트먼트,는 상당한 차이가 나타났는 가짜이 제어합니다. 그러나,다른 그룹 에이징을 보였다 훨씬 적은 식 콜라겐의 유형을 비교했을 때 나는 거짓 제어 쥐(그림 3(a)). 0.1%DMAE+AA,0.2%DMAE+AA 또는 0 으로 치료할 때.,2%DMAE 단독으로,콜라겐 유형 III 에 대한 성적표 수준은 노화 대조군보다 상당히 높았지만 가짜 대조군보다 유의하게 적었다(그림 3(b)). 잠재적으로 키 레귤레이터에서는 피부노화,MMP-1 메시지가 증가에 대응하여 하나 0.1%DAME+AA 또는 0.2%DAME+AA 처리하여 통계적으로 유의한 차이는 노화의 제어,하지만 가짜 컨트롤 쥐(그림 3(c)). 대조적으로,모든 노화 그룹에서 TIMP-1 에 대한 성적표 수준은 sham 대조군의 훨씬 낮은 수준으로 유의하게 하향 조절되었다(그림 3(d)).,
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
Measurement for collagen metabolism of D-gal induced aging skin after each treatment., 정량적 RT-PCR 에 의해 콜라겐 타입 I(a),콜라겐 타입 III(b),MMP-1(c)및 그 억제제 및 TIMP-1(d)의 발현에 대해 피부 상처를 처리하고 분석 하였다. 식 수준에 대한 각각의 타겟 유전자 했을 정규화하여 생 참조는 유전자 및 보고 상대적으로 값(ΔΔCt)을 얻은 노후화에서 관리 그룹입니다. 및 γ 는 각각 음의 대조군(그룹 1)및 가짜 대조군(그룹 8)과 비교할 때 유의 한 차이()를 나타낸다.
4., 토론
쥐 피부에 저용량 D-갈락토오스를 주입하면 가속 노화와 유사한 변화를 유도 할 수 있습니다. 우리의 연구에서,쥐의 노화 모델은 머리 색깔 변화,활동 감소 및 신경 학적 손상을 보였다. 의 조직학적 변경 내용의 D-gal 유도 노화 피부로 제공됩 얇은 표피의 감소세포층 및 스파 스,슬,또는 깨지에서 콜라겐 섬유 피부층이다. 또한,이 노화 피부에 표시하고 낮은 수준의 하이드 콘텐츠 및 mRNA 메시지에 대한 유형 I,type III 콜라겐,MMP-1,TIMP1 에 비해 정상적인 피부 조직입니다., 이러한 모든 데이터는 것이 좋습니다 주입의 125mg/kg·d D-갈락토오스를 위한 6 주는 기술적으로 가능하게 만들 subacute 노화를 위한 모델을 흉내내는 인간의 노화 피부입니다.
우리의 연구 결과 나타난 coinjection 의 DAME 과 AA 증가한 수준의 하이드 콘텐츠와 콜라겐 형 식의 D-gal 유도 노화하는 피부에 도달하는 약 동일한 수준의 정상적인 피부조직을 부여 할 때 높은 용량의 0.2%DAME+AA 치료입니다. 조직 학적 변화는 상승 된 표피 및 피부 두께 및 단단히 배열 된 피부 콜라겐 섬유로 나타났다., 더 많은 흥미롭게도,법에 의해 coinjection 의 DAME 과 AA 크게 높은 MMP-1 유전자 발현에서 피부 노화를 상응하는 수준의 정상적인 쥐지에 대한 억제제의 TIMP1 는 크게 downregulated 에서 모든 노화 쥐. 이러한 결과를 제법에 의해 coinjection 의 DAME 과 AA 긍정적인 규제에서 콜라겐 이화에 복구하고 재건의 피부 노화를 지연의 노화 피부입니다., 이전 연구 보여 감소한 생산 콜라겐의 유형이 내가 증가하고 콜라겐 합성을 유형 III MMP-1 에서 피부 노화;그러나 우리의 결과 표시 mRNA expression 콜라겐 유형 III MMP-1 었다 훨씬 적은 노화제의 것보다 정상적인 쥐. 그것은 될 수 있는 교원질 대사를 거쳐 다른 방법으로 정상적인 사 피부 변경을 가진 노화 및 D-gal-유도 아 급성 피부 노화 모델입니다. 우리의 연구는 또한 보여 주입의 DAME 또는 AA 혼자 보 효과에서 하이드록시프롤린 내용 또는 메시지에 대한 입력 내가 콜라겐과 MMP-1 에 노화 피부입니다., 이러한 데이터를 나타내는 부수적인 사용 DAME 과 AA 할 수 있는 유일한 방법은 수 있습을 발휘한 노화 방지 조치 이 D-gal 유도 노화 피부 모델에 의해 조절 collagen type I 대사 및 개조 구조의 노화 피부입니다.
이전의 연구 결과는 경작 토끼의 피부 게재 반응을 DAME 에 의해 대규모 공포 화와 농도 의존 방식이다. 토끼 외이의 표피는 또한 현저히 두껍게되었고 3%DMAE 의 국소 적용에 반응하여 vacuolization 을 나타내는 명확한 perinuclear 팽창을 나타냈다., 그것은 것을 제안했 vacuolar 발음해서 장악된 세포는-cytopathology 에서 수 있지 않을 사람이 개선에서 피부의 모양이 빠르게 생산하여 국소 관리 DAME 과될 수 있 세포의 기초개선의 효과 DAME. 에서 우리의 결과로,공포 화와의 피부 fibroblast 에서 발생할 수 있습니다 모두 0.1%0.2%DAME 취급 피부 노화의 결과로,세포 부종과 증가 콜라겐 섬유밀도입니다. 상피세포의 노화 피부는 또한 대응하는 더 높은 농도가 0.2%DAME 에 의해 공포 화와는 제공으로 증가 상피 두께입니다., 그러나 이것들은이 문제를 명확히하기 위해 더 많은 연구가 필요할 수 있습니다.
또한,측정의 피부 물 콘텐츠를 보여주지 사이의 차이는 모든 치료 쥐는 제안 DAME 및 복합 AA 한정적인 효과로 피부에 수분을 공급합니다. 이 때문일 수 있습니다 낮은 수준의 농도 및 짧은 작업 기간은 현지 사용할 수 있 DAME 에서 상피층을 때 직접적인 피하 주사를 위해 사용되었 DAME 납품,다른 국소 응용 프로그램의 DAME.
5., 결론
D-갈락토오스 유도 노화 모델의 쥐,요법을 제공함으로써 DAME 과 AA 를 대상으로 직접 조직을 표시하는 노화 방지 효과를 촉진하여 콜라겐 합성 및 분해 개조한 피부의 질감과 개선의 두께 노화 피부입니다. 이 실험은 쥐 모델을 사용했지만 결과는 임상 작업과 관련이 있습니다., 추가 조사의 메커니즘을 이해하기 위해 작업의 디메틸아미노에탄올 및 합성 아미노산에서 피부 노화에 도움이 될 것입 개발하고 테스트하는 더 강력하고 효과적인 스킨케어 요법을 위한 추가 인간의 평가입니다.
이해 관계의 충돌
저자는이 논문의 출판과 관련하여 이해 관계의 충돌이 없다고 선언합니다.피>