Promega Connections (Polski)
ze smutkiem rozpoznajemy odejście Dr. Fredericka Sangera. Sanger jest znany biologom molekularnym i biochemikom na całym świecie za swoją technikę sekwencjonowania DNA, za którą otrzymał w 1980 roku Nagrodę Nobla w dziedzinie chemii.
warto również zauważyć, że laboratorium Sangera wykonało pierwszą kompletną sekwencję genomu, genomu DNA wirusa o długości ponad 5000 par zasad.
Nagroda Sangera w 1980 roku była drugą nagrodą Nobla, którą po raz pierwszy otrzymał w 1958 roku za określenie struktury chemicznej białek., W pracy tej Sanger wyjaśnił nie tylko aminokwasy, które składały się na insulinę, ale także kolejność, w jakiej występowały te aminokwasy.
About Sanger Sequencing
Sanger DNA sequencing is also known as the chain-termination method of sequencing. Technika Sangera wykorzystuje dideoksynukleotydy lub ddNTPs oprócz typowych deoksynukleotydów (dNTPs) w reakcji. ddNTPs powoduje zakończenie nici DNA, ponieważ ddntps brak grupy 3 ' – OH wymaganej do tworzenia wiązań fosfodiestrowych między nukleotydami. Bez tego wiązania łańcuch powstających nukleotydów zostaje zakończony.,
sekwencjonowanie Sangera wymaga jednoniciowego DNA, podkładu DNA (znakowanego radioizotopem lub ze znacznikiem fluorescencyjnym), polimerazy DNA, dNTPs i ddNTPs. Cztery reakcje są ustawione, po jednej dla każdego nukleotydu, G, A, T i C. w każdej reakcji uwzględniono wszystkie cztery dNTPs, ale tylko jeden ddntp (ddATP, ddCTP, ddGTP lub ddTTP) jest dodawany. Reakcje sekwencjonowania są wykonywane, a produkty denaturowane i oddzielone wielkością za pomocą elektroforezy z żelu poliakrylamidowego.
Ta mieszanka reakcji powoduje różne długości fragmentów reprezentujących na przykład położenie każdego nukleotydu w sekwencji, ponieważ podczas gdy w reakcji jest więcej dATP niż ddATP, jest wystarczająco dużo DDATP, że każdy ATP ostatecznie zamiast tego jest zastąpiony ddATP, co powoduje zakończenie łańcucha. Rozdzielenie za pomocą elektroforezy żelowej ujawnia Rozmiar tych fragmentów zawierających ddATP, a tym samym lokalizacje wszystkich nukleotydów w sekwencji. Podobne informacje są dostępne dla GTP, CTP i TTP.,
metoda sekwencjonowania DNA Maxama i Gilberta miała przewagę w czasie stosowania z DWUNICIOWYM DNA. Jednak ta metoda wymagała rozdzielenia nici DNA lub frakcjonowania fragmentów enzymu restrykcyjnego, co skutkowało nieco bardziej czasochłonną techniką w porównaniu z metodą z 1977 roku opublikowaną przez Sanger et al.
Dr Sanger urodził się w 1918 roku w Gloucestershire w Wielkiej Brytanii jako syn lekarza. Choć początkowo planował pójść za ojcem w kierunku medycyny, biochemia stała się jego życiową pasją i obszarem badań., Sanger przeszedł na emeryturę w wieku 65 lat, aby spędzać więcej czasu w hobby ogrodnictwa i żeglarstwa.