Dolly às 20: A história dentro no mais famoso do mundo ovelhas

Jeff J. Mitchell/Reuters

Dolly, o primeiro mamífero clonado de uma célula adulta, nasceu a 5 de julho de 1996. Mas ela foi criada cinco meses antes, em uma pequena sala no Instituto Roslin, fora de Edimburgo, Reino Unido.Karen Walker, embriologista, terapêutica PPL: no dia em que fizemos a Dolly, tivemos um dia tão horrível.,

ill Ritchie, embryologist, Roslin Institute: It was 8 February 1996. Eu pesquisei. Sabemos que foi um dia de lixo: tivemos vários problemas com infecções e coisas.Walker: é uma pena que o edifício tenha sido demolido, caso contrário você poderia ver o quarto em que Dolly foi feita. Eu uso a palavra “quarto” vagamente, porque era realmente apenas um armário grande, que, quando Bill e eu estávamos lá, você poderia ter apenas duas cadeiras e a incubadora.Ritchie: era literalmente o armário. Era o armário no fim do laboratório., Quando recebemos as equipas de filmagem mais tarde, não podiam acreditar, não havia espaço para filmar.

Walker e Ritchie foram parte de um projeto no Instituto Roslin e spin-off PPL Terapeutics, com o objetivo de fazer mudanças genéticas precisas para animais de fazenda., A equipe científica, liderada pelo embriologista de Roslin Ian Wilmut, argumentou que a melhor maneira de fazer essas mudanças seria ajustar o genoma de uma célula na cultura e, em seguida, transferir o núcleo para uma nova célula.Ritchie: a maneira simples de descrever a transferência nuclear é pegar um oócito, um ovo não fertilizado, e remover os cromossomas. Você então pega uma célula completa que contém ambos os cromossomos masculinos e femininos — todas as nossas células fazem, exceto as gónadas., Pegas nessa célula e FUNDES – a com o ovo enucleado, activas — a, o que a começa a crescer, e transferes — a para uma mãe substituta. Espero que, com os dedos cruzados, consiga uma cria clonada, uma cópia do animal de quem tirou a célula.Walker: tedioso é absolutamente a palavra. Estás sentado, a olhar para um microscópio e tens as duas mãos nos micromanipuladores. É como os joysticks que as crianças usam hoje em dia nos jogos. Se o teu cotovelo escorregasse, podias limpar o prato todo.,um ano antes, a equipe havia produzido ovelhas gêmeas, chamadas Megan e Morag, por clonagem de células embrionárias cultivadas em um esforço liderado pelo biólogo de desenvolvimento Roslin Keith Campbell. Mas neste dia, em fevereiro de 1996, os problemas com as linhas de células fetais que eles tinham planejado usar significava que eles precisariam de outro doador nuclear.Walker: minha memória é de bater como uma galinha, pensando: “o que vamos colocar?”porque as células que íamos usar não estão lá. A última coisa que queres fazer é desperdiçar os oócitos que tens. Queríamos tentar algo, pelo menos.,Angela Scott, técnica de cultura celular, PPL: Eu recebi a palavra de Karen para dizer que as células que eles esperavam tinham sido contaminadas. Perguntaram-me se tinha células que pudessem usar. As células que eu tinha eram células epiteliais de ovinos: estávamos olhando para aumentar a expressão de proteínas no leite. Estas eram células adultas.Alan Colman, director de investigação, PPL: eu tinha vindo de um fundo de transferência nuclear com John Gurdon . Ele nunca conseguiu um sapo adulto usando transferência nuclear de um doador de células adultas., Ele tinha conseguido arranjar girinos usando células adultas, mas nunca conseguiu arranjar um sapo adulto. Não pensei que funcionasse com células adultas. Mas não tínhamos outra linha celular para acompanhar, então todos concordamos que usaríamos essas células da glândula mamária e ver o que aconteceu, ganharíamos alguma experiência. Estas eram de uma ovelha de 6 anos, de meia-idade, para uma ovelha.Ian Wilmut, embriologista, Roslin: isso é algo que está errado até hoje. Dolly é descrita como o primeiro mamífero clonado de uma célula adulta. Ela é o primeiro clone adulto, ponto final. Ela é muitas vezes mal vendida.,apesar de vacas clonadas e transgênicas serem mais valiosas para a indústria, a equipe de Roslin trabalhou com ovelhas por razões práticas.Wilmut: os bovinos são incrivelmente caros e têm um intervalo de longa geração. As ovelhas são muito menos caras e muito mais fáceis de trabalhar. E conhecíamos a biologia reprodutiva. Era muito provável que se conseguíssemos fazer algo funcionar em ovelhas, isso funcionaria em vacas. As ovelhas são vacas pequenas e baratas.John Bracken, Assistente de pesquisa agrícola, Roslin: haveria 40-60 animais a serem submetidos a cirurgia todas as semanas durante a época de reprodução., É um monte de ovelhas diferentes no sistema, e que teve que ser monitorado com muita precisão para que os animais estavam no lugar certo na hora certa.

Walker: Bill costumava manter os embriões e oócitos — quando os trazia de volta da fazenda — em seu bolso de camisa. Eu não tinha um bolso de camisa de cima, então eu costumava enfiá-los dentro do meu sutiã. Era uma forma de mantê-los quentes e trazê-los de volta para o laboratório e colocá-los num ambiente controlado. Acho que dentro do meu soutien não estava muito controlado, mas o bolso da camisa do Bill também não.,Ritchie: no dia em que fizemos Dolly, eu teria feito a enucleação, e ela teria feito a fusão. Era a nossa maneira normal de fazer as coisas.fiz a fusão no dia em que fizemos a Dolly. O Bill e eu brincamos, que ele é a mãe e eu sou o Pai porque, essencialmente, eu era o mímico para o que o esperma faria.

eles transferiram 277 núcleos da linha de células mamárias — de uma raça de face branca conhecida como Dorset Finn-para ovos da raça hardy Blackface escocesa. Apenas 29 dos embriões resultantes foram implantados em ovelhas substitutas. As expectativas eram baixas: parecia quase impossível que um núcleo celular adulto pudesse ser reprogramado para dar origem a um animal vivo. A maioria dos embriões clonados abortados, muitos mesmo antes de uma gravidez pode ser determinada com ultra-som.Wilmut: a época de criação de ovinos começa em outubro e termina em Fevereiro, Março-ish., No Natal, tínhamos estabelecido gravidezes após transferência de células fetais, então isso estava indo bem. Se não tivéssemos feito isso, provavelmente não teríamos apostado em trabalhar com o que se tornou Dolly, as células mamárias.Angelika Schnieke, bióloga molecular, PPL: lembro-me de conhecer Ian Wilmut na cantina, e ele era muito céptico. Ele disse: “eu ficaria surpreso se funcionasse, mas a PPL está pagando as experiências, então nós estamos fazendo.”

Bracken: nós digitalizamos todos os receptores que tinham embriões transferidos, e sabíamos que eles eram ovelhas importantes., Todos os dias que os cientistas sabiam que estávamos a analisar, eles gostariam muito de saber se havia alguma gravidez.não desci para ver todos os exames. Mas com a Dolly-porque sabíamos que aquilo eram células que eu e o Bill tínhamos colocado — eu tinha caído naquele dia em particular com o John.fiquei muito contente por ter sido uma gravidez. Não percebi a verdadeira importância porque não nos disseram. Sabíamos que era uma gravidez importante. Não tinha o mesmo peso. Não estávamos a pensar, Uau!, Se isto progride para um cordeiro vivo, isto vai ser um batedor do mundo, ou vai transformar a compreensão científica em sua cabeça.”

Walker: I ” D fez um vídeo em branco comigo, para que eu pudesse mostrar aos meus colegas. Esse vídeo está no meu apartamento, e para minha vergonha, nunca o transferi para DVD. Devia.Schnieke: lembro-me do dia em que fizemos o primeiro scan. Sempre perguntámos. E depois vimos a fotografia e os exames. Então só tens de esperar que dure e vá até ao fim.,a minha memória é que eles olhavam para o dia 30 ou 35, então há mais 120 dias , onde você continua suspirando com alívio e esperança.

Reuters

Ian Wilmut com Dolly em exibição no Museu Nacional da Escócia.

apenas alguns dos membros da equipa testemunharam o seu nascimento.

Bracken:aconteceu por volta das 4: 30 da tarde. Assim que ela entrou em trabalho de parto, ligámos ao veterinário Dick para que um dos veterinários saísse., Mesmo que Douglas McGavin e eu provavelmente tivéssemos 50 anos de experiência entre nós, teria sido inédito se decidíssemos ajudar o nascimento e algo tivesse corrido mal.

Ritchie: Nós sabíamos que Dolly estava prestes a nascer, e eu acho que ela estava mostrando sinais de ficar perto de lambing, e eis que eu passei e havia pedaços de Dolly nascimento. Estava lá um veterinário, então ela certificou-se que o animal estava bem e tirou o Cordeiro.

Bracken: era absolutamente normal. Sem complicações. Ela era um cordeiro muito viável., Ela levantou-se muito rapidamente, provavelmente na primeira meia hora, o que é uma boa indicação de que as coisas estão normais.acho que estava a saltar para cima e para baixo quando vi aquela cara branca.a Karen estava num casamento na altura.tinha-lhe dado o número de fax do hotel. Quem me dera ter ficado com o fax. Dizia: “ela tem um rosto branco e pernas peludas.Scott: Eu não sei o que eles devem ter pensado no hotel: “Uau, isso é um bebê muito incomum.”

Wilmut: eu estava na colocação. Recebi um telefonema a dizer que tínhamos um cordeiro vivo., Dei instruções para que não estivesse lá ninguém que não tivesse de lá estar. Muitos estavam curiosos. Obedeci à minha própria regra porque não tinha nada para contribuir.estou ao lado de Douglas McGavin a ver o veterinário assistir a este nascimento, e fiz uma observação de improviso a Douglas. Eu disse: “Sabes o que vamos ter de chamar a este cordeiro? Nós”vamos ter que chamar-lhe Dolly”, depois de Dolly Parton, porque as células são derivadas de tecidos mamários.Wilmut: sendo um pouco puritano, eu poderia estar um pouco preocupado. Olhando para trás, sem dúvida que era um grande nome.,isto é um boato. Nunca me disseram Isto directamente. Mas ouvi dizer que contactaram a Dolly Parton e disseram: “Temos esta ovelha clonada que tem o teu nome.não sei como a mensagem chegou, mas disseram-nos que o agente dela tinha dito: “a publicidade da baaad não existia.”Não sei se isso é verdade.

ao longo dos próximos meses, a equipe de Wilmut confirmou que Dolly era um clone da linha celular mamária, e escreveu os resultados. Seu nascimento deveria ser mantido em segredo, até que o Artigo da natureza que descreve o experimento pudesse ser publicado em fevereiro de 1997 (I., Wilmut et al. Nature 385, 810-813; 1997).Harry Griffin, Director científico, Roslin: dois ou três meses antes da publicação do artigo, fiquei a saber. Em termos de preparação, a PPL esteve envolvida. Eles viram isso como uma oportunidade de obter publicidade para si mesmos. Trabalhamos com a empresa de Relações Públicas deles, de Facto. Preparámo-nos bastante.,

Wilmut: Ron James, que foi o executivo-chefe do PPL therapeutics, e eu foi citada como o principal porta-vozes e dado um pouco de treino por ex-BBC pessoas, que, primeiro veio e bastante agressiva preso microfones até nossos narizes e perguntou agressivo perguntas, e, posteriormente, fez-lo com muito cuidado. Não nos aproximámos da forma agressiva que tentaram primeiro, o que foi chocante. Tenho a certeza que valeu a pena.tínhamos tudo organizado., As chamadas seriam direcionadas para De Facto e eles tentariam organizar alguma coerência em nossa resposta em termos de quem obteve prioridade e quem não”. tudo isso culminaria, esperamos, na quinta-feira que o jornal saiu. O que foi isso, 27 de fevereiro? Claramente, ele não”.

Wilmut: Robin McKie no The Observer vazou. Ele vai negar a acusação.Robin McKie, editor de Ciência e Tecnologia, The Observer, London: I didn’t see that stuff in Nature. Não o culpo por estar zangado, mas esforcei-me muito para evitar as coisas que me fariam ser acusado disso., Eu tinha ajudado um par de caras que estavam fazendo um programa de TV sobre genética, e eles disseram, ” Ah, a propósito, eles clonaram uma ovelha em Edimburgo.”Eu não acreditei neles, mas telefonei a algumas pessoas no terreno, e uma delas na América confirmou. Mas estava muito, muito preocupada. Estava a dizer algo sensacional, sem provas de nada que tivesse acontecido. Disse ao meu editor-adjunto tudo o que sabia e ele obrigou-me a escrevê-lo. Então a merda bateu no ventilador.,Ian me ligou E disse que ele tinha sido chamado e disse que o observador iria publicar a história no domingo antes da publicação na natureza.Ian e eu fomos ao Instituto por volta das 9h do domingo, sem saber se as pessoas conseguiam ou não passar. O telefone tocou continuamente. Tivemos uma circunstância bizarra em que um telefone começou a tocar num armário de limpeza. Quando eu respondi, foi, eu acho, o Daily Mirror, que de alguma forma tinha esta conexão particular. Cerca das nove e meia da noite, fomos para casa.,Jim McWhir, cientista de células estaminais, Roslin: lembro-me de ter vindo no dia seguinte ao rompimento do embargo e havia várias carrinhas de satélite no estacionamento.Wilmut: havia camiões de televisão por todo o lado. Fui falar sobre a “Good Morning America”.Griffin: CBS, NBC, ABC, BBC, all there wanting interviews with Ian, wanting to see the sheep. Foi um caos. Acho que nunca se pode apreciar a intensidade da comunicação social em pleno voo, a não ser que tenha sido você a experimentá-la.

Jeff J., Mitchell / Reuters uma reportagem de domingo sobre Dolly chamou a atenção da mídia para a Escócia.

McWhir: era apenas pandemónio. Indo para a unidade de animais grandes, era apenas uma floresta de lâmpadas e repórteres. Foi incrível. Virei – me e voltei ao trabalho.a minha secretária pousava o telefone e estava a tocar imediatamente. Um dos Nomes que ouvi ser mencionado foi Harold Shapiro . Ela disse, “Ian Wilmut não pode falar com você agora, pode ligar mais tarde?,”Bill Clinton pediu-lhe para relatar dentro de 90 dias sobre as implicações éticas da clonagem. Ouvi o nome dele e disse: “Não, definitivamente queremos falar com ele.”

Colman: quando você está incorporado em um projeto, você tem o que você considera ser boas razões científicas para fazê-lo. Tudo o que fizemos foi coberto por um comité de ética. Tínhamos passado por muitas preocupações em matéria de saúde animal. A nossa preocupação era mais sobre esse tipo de reacção. Não o estávamos a fazer como prelúdio para clonar humanos.

Griffin: as pessoas na mídia pressionaram este ponto repetidamente., Fomos acusados de manter o segredo do nascimento da Dolly porque estávamos a pensar em clonar um humano. Tínhamos a nossa posição clara a esse respeito: era antiético e inseguro.Wilmut: combina com o trabalho. Só tens de explicar que não é o caso.Schnieke: na Europa, foi imediatamente visto como um negativo. “O que eles fizeram agora e o que poderiam fazer a seguir?”A polícia do Instituto explicou-nos o que se faz se há uma ameaça de bomba. Os pacotes estavam a ser analisados à procura de explosivos.,Walker: lembro-me da assistente pessoal de Ian Wilmut, Jackie, receber telefonemas depois de tudo ter acontecido na imprensa. Ela tinha muitas chamadas, algumas eram um pouco malucas, de pessoas que queriam os seus cães clonados. Os mais tristes eram aquelas pessoas que tinham perdido crianças ou que tinham doenças próprias, e isso ia ser um avanço que poderia curar doenças diferentes.

Colman: Dolly parecia capturar a imaginação. Era um animal peludo. Ter um nome identificável ajudou imenso.,se ela foi vista como um animal que estava trancado, que poucas pessoas viram, isso poderia ter perpetuado mais má publicidade. Mas eu acho, por causa da abertura, que as pessoas foram autorizadas a ir visitá-la e ser mostrado ao redor, isso ajudou na aceitação do público.Griffin: ela se portou bem para a câmera, e todos puderam ver que ela era um animal perfeitamente normal. Como ela era acessível e fotogênica, ela se tornou a ovelha mais famosa do mundo. Qualquer gerente de marketing teria matado por isso., Em algumas das fotos é como se ela estivesse entrevistando a mídia.levei um fotógrafo para ver a Dolly. Este tipo produziu a coroa de festa de uma criança, uma coisa dourada. Eu disse: “Acho que não devíamos.”Estávamos todos muito interessados em não permitir que Dolly se humanizasse. Ela era uma ovelha e pronto.longe da mídia e das câmeras, tentamos tratá-la como as outras ovelhas, não como uma espécie de celebridade, que ela obviamente se tornou.,Walker: a primeira vez que ela foi tosquiada, eles pegaram a lã — que eu tenho, na verdade — para ser tricotada em um jumper para uma instituição de caridade cística-Fibrose. Viste-a no Museu? Ela está atrás de uma caixa de vidro porque as pessoas estavam sempre a beliscar-lhe pedaços de lã. Pelo menos fiquei com a minha lã enquanto ela ainda estava viva.Dolly viveu por seis anos e meio e deu à luz vários cordeiros. Mas em 2003, ela começou a mostrar sinais de doença.Era Dia dos Namorados. Acho que era uma sexta-feira. Sabíamos que havia o potencial para esta doença pulmonar se desenvolver.,Griffin: ela sofria de uma doença chamada jaagsiekte. É uma doença dos pulmões e uma ou duas outras ovelhas tinham caído com ela.eles pensaram que ela devia ser radiografada na escola de veterinária. Ficaram surpreendidos com o tamanho do tumor nos pulmões. Nestas circunstâncias, discutimos o quanto devemos lutar para que ela recupere. Não seria mais gentil deixá-la ir? Então, sacrificámo-la. Você é responsável pelo bem-estar dos animais em seu projeto.,

Roslin Institute/Univ.
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uma década depois, outra perda atingiu a equipe científica com a morte de Keith Campbell.Colman: Keith era a força motriz. Ele foi a pessoa que fez o importante trabalho experimental que semeou as sementes do protocolo que todos usamos. A Dolly não teria acontecido sem o Keith.Ritchie: Keith era, eu suponho, “incomum” é provavelmente a coisa que você diria sobre ele. Ele era muito hippy., Conduzia um Volkswagen Beetle, fumava rolos, tinha cabelo comprido.Colman: ele não tinha uma grande relação com Ian. Eram personalidades muito diferentes e frequentemente discutiam.Wilmut: não me lembro de linhas. Por vezes, teríamos prioridades ligeiramente diferentes.é sempre muito difícil dividir o reconhecimento. O que foi obviamente a causa de algum aborrecimento e algumas críticas é que ele não conseguiu a primeira autoria no Dolly paper. Ele apanhou todos os outros. Houve uma altura em que ele disse que o Jornal da Megan e do Morag era mais importante do que a Dolly., Ele definitivamente estava frustrado por eu ter um FRS (membro da Royal Society) e, em última análise, um título de cavaleiro.após uma disputa doméstica, Campbell suicidou-se em 5 de outubro de 2012.Colman: Keith era um grande amigo meu e costumávamos andar de bicicleta de montanha na Escócia à noite, depois do trabalho. Falei com ele três dias antes de morrer. Fiquei muito chocado.isso atingiu-me com muita força, com mais força do que eu imaginava. Não o via há muitos anos. Éramos um grupo tão próximo e apertado na altura. Tinha de ser.,

Colman: eu fui a uma reunião em Paris em janeiro passado, onde eles tiveram um prêmio póstumo. Eles fizeram uma enquete de palha de quantas pessoas na platéia tinham sido ajudadas pelo que Keith tinha feito, e um grande número de pessoas colocou suas mãos para cima.as técnicas desenvolvidas na criação da Dolly foram usadas para copiar animais valiosos e fazer animais transgênicos. Mas em laboratórios biomédicos, Dolly insinuou um futuro no qual as células poderiam ser reprogramadas para um estado embrionário e usadas para tratar doenças humanas.,Wilmut: o nascimento de Dolly virou as regras do desenvolvimento de cabeça para baixo, e fez com que muitos biólogos pensassem de forma diferente.Jeanne Loring, bióloga de células estaminais, Instituto de Pesquisa Scripps, La Jolla, Califórnia: esse foi o início da clonagem de gado, que na verdade é bastante popular agora. Há um enorme valor em ser capaz de melhorar o gado, e isso deu às pessoas outra ferramenta.George Seidel, biólogo reprodutor animal, Universidade do Estado do Colorado, Fort Collins: existem touros clonados produzindo sémen que está sendo vendido., Há um touro Angus chamado resposta Final, ele tem meio milhão de filhos ou algo assim. Então o clone dele chama-se resposta final II, e podes comprar o sémen dele a metade do preço. A minha mulher e eu temos um rancho de gado, por isso usamos a resposta final II. raios, é a mesma genética. Mas do ponto de vista teórico, o material transgênico é realmente muito mais importante do que apenas fazer cópias. Para fazer nossa primeira vaca transgênica, criamos milhares de embriões. Foi um grande esforço. Um décimo do dinheiro, um décimo dos animais é o que os transgénicos mais a clonagem podem fazer por ti.,Robert Lanza, diretor científico do Astellas Institute for Regenerative Medicine, Marlborough, Massachusetts: I was excited. Agora, esperamos poder aplicar a mesma técnica-não tanto para os animais e a agricultura -, mas para tratar uma longa lista de doenças humanas. O que a Dolly mostrou foi o enorme poder dessa tecnologia e a magia do ovo. Havia fatores no ovo que poderiam levar as células adultas para trás no tempo e restaurá-las a um estado embrionário.Shinya Yamanaka, cientista de células estaminais, Universidade de Kyoto, Japão: minha resposta inicial foi “Wow!, É como ficção científica.”Mas não era algo em que eu planeava trabalhar. A julgar pelo papel, o processo de clonagem é muito tecnicamente desafiador. No ano seguinte, saiu o primeiro papel de células estaminais embrionárias humanas. Foi quando reavaliei a Dolly. Eu pensei, pelo menos em teoria, que deveríamos ser capazes de reprogramar as células somáticas de volta para o estado embrionário para que possamos fazer células-tronco tipo ES diretamente da pele ou células sanguíneas.

McWhir: um resultado como Dolly para as pessoas em seus trilhos, e eles dizem: “Bem, espere. Se eu dissesse que é impossível, o que mais estou dizendo É impossível?,”

Schnieke: você tem algumas experiências onde ele traz à tona seu batimento cardíaco. A Dolly era uma.Ritchie: é como ter filhos. Eu também não tenho. Talvez a Dolly seja esse tipo de criança.

Wilmut: seria errado dizer que o meu nome é conhecido em todo o mundo – mas Dolly é.