Anxiolitic-Cum ar fi Efecte de Ulei Esențial de Bergamotă Sunt Insensibile la Flumazenil la Șobolani

Abstract

tulburări de Anxietate sunt una dintre cele mai frecvente tulburări psihice, și benzodiazepine (BDZs), care acționează în acid gamma-aminobutiric de tip a (GABA-A) receptor complex, reprezintă cele mai frecvente medicamente antianxietate din lume. Cu toate acestea, utilizarea cronică a BDZ provoacă mai multe reacții adverse. Se pare că aromoterapia este mai sigură pentru gestionarea anxietății., Uleiul esențial de Bergamot (BEO) extras din fructele citrice bergamia Risso et Poiteau, ca și alte uleiuri esențiale, este utilizat pe scară largă în aromoterapie pentru ameliorarea simptomelor anxietății induse de stres. Interesant, datele preclinice indică faptul că BEO induce efecte anxiolitice/relaxante în sarcinile comportamentale animale care nu pot fi suprapuse celor ale benzodiazepinei diazepam. Pentru a elucida mai bine implicarea transmisiei Gabaergice, studiul de față examinează efectele pretratamentului cu flumazenil (FLZ), un antagonist al site-ului benzodiazepinei, asupra efectelor BEO folosind sarcină în câmp deschis (OFT) la șobolani., Datele obținute arată că ZLL nu afectează în mod semnificativ efectele comportamentale ale fitocomplexului. Aceste rezultate demonstrează lipsa suprapunerii între efectele comportamentale BEO și BDZ, contribuind la caracterizarea profilului neurobiologic al uleiului esențial pentru utilizarea sa rațională în aromoterapie.

1. Introducere

Mai multe uleiuri esențiale extrase din fructe aparținând genului Citrus sunt utilizate în aromoterapie pentru a trata anxietatea, somnul, starea de spirit și tulburările cognitive . Se presupune că bergamota provine din Citrus aurantium L. și Citrus limon L., sau Citrus aurantifolia Swing . Ulei esențial de bergamotă (BEO) este obținut prin presare la rece din epicarp și, parțial, a pericarpului proaspăt de fructe de Citrus bergamia Risso et Poiteau, potrivit italiană Farmacopeea a XII-a ed. BEO cuprinde o fracțiune volatil (93-96% din total) care conțin derivați oxigenați (cum ar fi linalool) și sesquiterpene și monoterpene hidrocarburilor (cum ar fi limonen) și un nevolatila fracțiune (4-7% din total) care conțin polymethoxylated flavone, ceară, cumarine, și psoraleni, cum ar fi bergamottin (5-geranyloxypsoralen) și bergapten (5-metoxipsoralen) ., Limonenul, γ-terpinenul și β-pinenul, împreună cu linalool și acetat de linalil sunt printre cei mai abundenți compuși găsiți în fracția volatilă și toți împreună constituie >90% din întregul ulei . În ultimul deceniu, studiile preclinice au susținut utilizarea terapeutică a BEO. În special, uleiul de bergamot este înzestrat cu efecte neurobiologice remarcabile care derivă parțial dintr-o interferență cu mecanismele de bază care reglează fin plasticitatea sinaptică în condiții fiziologice și patologice, adică.,, ischemie cerebrală , durere și simptome comportamentale și psihologice ale demenței . În condiții bazale, BEO ridică nivelurile extracelulare de aminoacizi discreți cu funcție neurotransmițătoare după administrarea sistemică sau focală în hipocampul șobolanilor care se mișcă liber . Mai mult, dozele sistemice de BEO măresc corelația electrocorticografică a alertei, vegherii și relaxării ., Capacitatea BEO de a modifica frecvența EEG, legată de alertă și relaxare, susține datele care arată efectele anxiolitice-relaxante după administrarea sistemică sau inhalatorie a acestui fitocomplex în sarcinile comportamentale la animale. Interesant, se obțin rezultate controversate comparând efectele BEO cu cele ale diazepamului (DZP). În fapt, în timp ce Saiyudthong și Marsden specula că componentele active ale fitocomplex de a interacționa cu BDZ-ul pe GABA-a receptorilor complexe care induc efecte anxiolitice , recent am demonstrat proprietățile BEO nu se suprapun cu efecte de DZP ., Deoarece transmisia GABAergică joacă un rol-cheie în fiziopatologia tulburărilor de anxietate, pentru a obține mai multe informații cu privire la mecanismul implicat în efectele anxiolitice ale BEO, scopul prezentului studiu este de a investiga efectele flumazenilului, un antagonist la locul de legare BDZ, asupra comportamentului indus de BEO în testul în câmp deschis (OFT) la șobolani.

2. Materiale și metode

2.1., Animale

șobolani Wistar Masculi (250-300 g; Charles River, Calco, Italia) au fost adăpostite în grupuri de câte patru în laborator standard cuști (40 × 25 × 15 cm) la temperatură constantă (22 ± 1°C) și umiditate relativă de (50%) sub un regulat lumină-întuneric program (luminile de la 7 a. m. la 7 p. m.). Înainte de experimentul OFT, șobolanilor li sa permis o săptămână de adaptare la condițiile de laborator cu acces liber la alimente și apă. Directiva Consiliului Comunității Europene din 24 noiembrie 1986 (86/609 / CEE) și L. D. 4 martie 2014 nr., 26 a fost urmat pentru a minimiza numărul de animale utilizate încă generatoare de rezultate fiabile.

2. 2. Materiale

2.3. Procedura experimentală

aclimatizarea șobolanilor a fost efectuată timp de 2 ore în ziua experimentului. Animalele au fost supuse obișnuinței. S-au format grupuri experimentale aleatorii. Șobolanii au fost supuși administrării intraperitoneale (i.p.) de BEO (500 µL/kg) sau ulei de jojoba . IP de FLZ (3 mg / kg), revenirea efectelor BDZ în OFT, sau vehiculul său (tween în soluție salină) a fost administrat ca pretratament 15 minute mai devreme., După treizeci de minute, efectele comportamentale au fost evaluate prin utilizarea testului OF . Acest protocol experimental este conform cu datele din literatură în care pretratamentul cu FLZ revine efectelor comportamentale ale diferitelor produse naturale în OFT la rozătoare .șobolanul a fost observat de pe un ecran dintr-un laborator apropiat, deoarece testul a fost înregistrat cu o cameră cu circuit închis. Testele comportamentale au fost efectuate între orele 09.00 și 13.00 în funcție de ritmurile circadiene. Înregistrările Video au fost supuse următoarei examinări de către un observator orb (care nu cunoaște tratamentele)., O supradoză de izofluran a fost utilizată pentru eutanasierea animalului după experiment. Camera comportamentală a fost ventilată, iar arena a fost spălată cu apă și curățată cu etanol 70% după sesiunile zilnice pentru a evita orice urme de miros rămase de BEO și excremente.

2. 4., Deschide-Test de Câmp

open-field test este considerat ca un indicator al stării emoționale a animalului, care permite o ușoară și destul de rapidă de evaluare bine definite comportamente, cum ar fi trecerea, perete de cultivare, ingrijire, centru, și imobilitate, și este utilizat pe scară largă în screening-ul de droguri care acționa asupra sistemului nervos central (SNC) . În special, traversarea și creșterea pereților pot fi, respectiv, considerate indicatori ai activității locomotorii și comportamentului explorator, în timp ce îngrijirea, centrul și imobilitatea sunt comportamente corelate pozitiv cu frica sau emoționalitatea ., Șobolanul a fost plasat în centrul unei arene circulare din plastic închis (75 cm diametru) într-o cameră izolată fonic cu lumină de 20 lux . Durata fiecărei sesiuni comportamentale a fost de 20 min. Evaluarea parametrilor (general activitatea locomotorie într-un interval de 5 min (pătrat limita treceri cu amândouă labele și perete de creștere), anxietate legate de comportament (față și corp îngrijire, cap de spălare, și timpul petrecut în centrul arena), și imobilitate) au fost filmate și analizate pentru a fi marcat (Labehaviour).

2, 5., Statistici

analiza statistică a constat dintr-o direcție sau două sensuri ANOVA, urmată de testul de comparații multiple Tukey folosind Graph Pad® 6.0. valoarea < 0, 05 a fost considerată semnificativă statistic.

3. Rezultatele

analiza Anova bidirecțională indică diferențele dintre tratament și timp în ceea ce privește frecvențele de trecere și de creștere a pereților (Tabelul 1). În special, administrarea BEO reduce ambele comportamente atingând o semnificație statistică în comparație cu grupul CTR (Figura 1)., Administrarea sistemică de FLZ, cu 15 minute înainte de BEO, nu modifică scăderea frecvențelor de trecere și de creștere a pereților măsurate la șobolanii tratați cu uleiul esențial (Figura 1).analiza Anova unidirecțională indică, de asemenea, diferențe în timpul de îngrijire, centru și imobilitate (Tabelul 2). S-a observat o scădere semnificativă statistic în cazul toaletării la animalele tratate cu BEO comparativ cu grupul CTR. Pretratamentul cu FLZ nu este capabil să prevină acest efect (Figura 2).,în ceea ce privește perioada din mijlocul arenei, rezultatele indică faptul că administrarea sistemică a BEO reduce acest comportament atingând o semnificație statistică în comparație cu grupul CTR (Figura 2). Pretratamentul cu FLZ nu influențează acest efect al BEO, deși este prezentată o ușoară tendință () spre o creștere a timpului petrecut în centru (figura 2).mai mult, animalele tratate cu BEO, deși sunt încă vigilente, petrec mai mult timp în imobilitate în comparație cu grupul de control (Figura 3)., Interesant, la animalele pretratate cu FLZ, se observă o tendință de scădere a imobilității observată în grupul BEO, deși nu se calculează nicio diferență statistică () (Figura 3).pentru toți parametrii studiați, pretratamentul cu FLZ în grupul de control nu afectează comportamentele la animale în datele din literatura de specialitate care susțin OFT, utilizând un interval larg de doze de 0, 1–10 mg/kg .

4., Beo, ca și alte uleiuri esențiale, este utilizat pe scară largă în aromoterapie pentru a minimiza simptomele anxietății induse de stres, deși mecanismul de bază și interferența acestuia asupra transmisiei Gabaergice rămân de elucidat .administrarea BEO exercită efecte asemănătoare anxiolitice în multe cazuri care nu sunt contracarate în mod semnificativ de FLZ, un antagonist al site-ului BDZ. Ultimele constatări confirmă faptul că proprietățile BEO nu sunt paralele cu cele ale BDZs ., Aici am observat că activitatea locomotorie și comportamentul explorator, măsurată de trecere și de perete de creștere a frecvențelor, sunt reduse la animalele tratate cu BEO, comparativ cu grupul placebo și pretratarea cu FLZ nu a reușit să prevină efectele fitocomplex. Mai mult, în sesiunea de 20 de minute, se măsoară o reducere a comportamentului de îngrijire de către BEO care nu este afectată de pretratamentul cu FLZ. În total, aceste rezultate indică faptul că receptorul BDZ nu este implicat în aceste efecte ale BEO., Pretratarea cu FLZ previne parțial efectele BEO asupra imobilității și timpului petrecut în centrul arenei, adică comportamentele corelate pozitiv cu frica sau emoționalitatea, deși acest lucru nu a atins o semnificație statistică. Interesant, acesta din urmă ar susține o implicare a receptorului GABA-A în efectele BEO asupra acestor comportamente. GABA-a receptorilor conține isosteric site-ul pentru ligand endogen și mai multe alosteric site-uri de legare, care modulează activitatea receptorilor indirect și sunt obiectivele de diverse sintetice și compuși naturali ., Moleculele cu diferite structuri chimice și afinități afectează locul de legare și prezintă efecte farmacologice distincte. În special, mai multe acțiuni farmacologice pot fi atribuite modulării subunităților alfa specifice . De exemplu, proprietățile sedative și hipnotice sunt mediate de receptorii GABA-A care conțin subunități alfa-1, în timp ce modularea pozitivă a receptorilor GABA-A la subunitățile alfa-2 și/sau alfa-3 prezintă efecte anxiolitice .,

interesant, am demonstrat anterior că administrarea sistemică a BEO induce o eliberare moderată a GABA în hipocampul șobolanilor care se mișcă liber . Această constatare neurochimică, împreună cu efectele FLZ asupra imobilității și Centrului raportate aici, ar putea susține ipoteza că unii dintre compușii prezenți în fitocomplex ar putea interfera cu transmisia mediată de receptorul GABA-A. Mai multe studii au investigat implicarea acest neurotransmisia în anxiolitic-ca efecte unice de compuși volatili prezenți în uleiuri esențiale, cum ar fi BEO., În special, autorii sugerează că calea de administrare a compușilor ar putea modula acțiunea lor asupra site-ului BDZ care afectează efectele anxiolitice. De exemplu, linalool, administrat prin inhalare , induce efecte anxiolitice prevenite de FLZ, în timp ce administrarea sistemică nu produce efecte anxiolitice . Mai mult, administrarea sistemică a unui amestec de cis și epoxid de trans (+)-limonen induce efecte anxiolitice care sunt prevenite prin pretratarea cu FLZ . Cu toate acestea, atunci când (R)-(+)-limonen este administrat prin inhalare, efectul anxiolitic nu este blocat de antagonistul site-ului BDZ .,alte sisteme neurotransmițătoare au fost implicate în efectele de tip anxiolitic induse de uleiurile esențiale. De exemplu, șoarecii supuși inhalării uleiului de lămâie prezintă un efect antistres prin modularea neurotransmisiei dopaminergice, serotoninergice și Gabaergice . Inhalarea uleiului esential de lavanda prezinta efecte anxiolitice crescand nivelul serotoninei (5-HT) in cortexul prefrontal, striatum si hipocampus ., Mai mult, WAY100635, un antagonist al receptorului 5-HT, blochează acțiunea uleiului esențial de lavandă, în timp ce utilizarea antagoniștilor receptorului GABA-A este lipsită de efect . Date similare sunt obținute și de Galdino și colab. și de Tabari și colab. care au observat efecte anxiolitice după sistemice injecție de Spiranthera odoratissima și Rose geranium uleiuri esențiale contracarat printr-un pretratament cu 5-HT1A antagoniști ai receptorilor dar nu de FLZ .,în total ,aceste date susțin ipoteza că efectele anxiolitice ale uleiurilor esențiale și probabil ale BEO pot fi subliniate de mai multe mecanisme complexe care merită investigate în continuare.

5. Concluzia

BDZs sunt bine dezvoltate și frecvent prescris medicamente utilizate pentru a trata tulburări de anxietate; cu toate acestea, mai multe efecte secundare (de exemplu, letargie, amețeli, somnolență, sedare, și dependența) pot fi severe, astfel încât dezvoltarea de noi medicamente este necesar., Aceste reacții adverse au determinat răspândirea aromoterapiei, deși sunt disponibile date limitate despre mecanismele care stau la baza activității anxiolitice a uleiurilor esențiale. Rezultatele studiului nostru contribuie la aprofundarea caracterizării profilului neurofarmacologic al BEO. Acestea din urmă susțin ipoteza că efectele anxiolitice ale acestui fitocomplex nu sunt suprapuse celor ale BDZs și utilizării sale aromaterapeutice pentru tratamentul anxietății induse de stres.,

disponibilitatea datelor

datele utilizate pentru a susține rezultatele acestui studiu sunt disponibile de la autorul corespondent, la cerere.

conflicte de interese

autorii declară că nu există conflicte de interese în ceea ce privește publicarea acestei lucrări.

mulțumiri

autorii îi mulțumesc lui Guido Fico pentru suportul tehnic priceput. Această lucrare a fost susținută de Universitatea din Calabria „ex cotă 60%.”

---