conexiuni Promega
este cu tristețe că recunoaștem trecerea Dr. Frederick Sanger. Sanger este cunoscut biologilor moleculari și Biochimiștilor din întreaga lume pentru tehnica sa de secvențiere a ADN-ului, care a câștigat pentru el Premiul Nobel pentru Chimie din 1980.de asemenea, de remarcat, Laboratorul lui Sanger a realizat prima secvență completă a genomului, cea a unui genom ADN viral cu o lungime mai mare de 5.000 de perechi de baze.Premiul din 1980 a fost al doilea Premiu Nobel al lui Sanger, primul acordat în 1958 pentru determinarea structurii chimice a proteinelor., În această lucrare, Sanger a elucidat nu numai aminoacizii care conțineau insulina, ci și ordinea în care au apărut aminoacizii.Sanger secvențierea ADN-ului este, de asemenea, cunoscut sub numele de metoda de lanț-terminare de secvențiere. Tehnica Sanger utilizează dideoxinucleotide sau ddNTPs în plus față de deoxinucleotide tipice (dNTPs) în reacție. ddNTPs duce la încetarea de ADN pentru ddNTPs lipsa 3′-OH de grup necesare pentru phosphodiester formarea legăturii între nucleotide. Fără această legătură, lanțul de nucleotide care se formează este terminat.,secvențierea Sanger necesită un ADN monocatenar, un primer ADN (fie marcat radioactiv, fie cu o etichetă fluorescentă), ADN polimerază, dNTPs și ddNTPs. Patru reacții sunt stabilite, câte unul pentru fiecare nucleotide, G, a, T și C. În fiecare reacție toate cele patru dNTPs sunt incluse, dar numai unul ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP sau ddTTP), se adaugă. Reacțiile de secvențiere sunt efectuate și produsele denaturate și separate prin mărime utilizând electroforeza în gel de poliacrilamidă.
Această reacție se amestecă rezultate în diferite lungimi de fragmente reprezentând, de exemplu, locația de fiecare nucleotide din secvența, pentru că în timp ce există mai multe dATP decât ddATP în reacție, nu este suficient ddATP că fiecare ATP în cele din urmă, în schimb, este înlocuit cu un ddATP, care rezultă în întreruperea lanțului. Separarea prin electroforeză în gel dezvăluie dimensiunea acestor fragmente care conțin ddATP și, astfel, locațiile tuturor nucleotidelor din secvență. Informații similare sunt furnizate pentru GTP, CTP și TTP.,metoda de secvențiere a ADN-ului Maxam și Gilbert a avut avantajul în momentul utilizării cu ADN dublu catenar. Cu toate acestea, această metodă a necesitat separarea ADN-ului sau fracționarea fragmentelor enzimei de restricție, rezultând o tehnică oarecum mai consumatoare de timp, comparativ cu metoda din 1977 publicată de Sanger et al.Dr. Sanger s-a născut în Gloucestershire, Marea Britanie în 1918, fiul unui medic. Deși inițial plănuia să-și urmeze tatăl în medicină, biochimia a devenit pasiunea sa de-a lungul vieții și domeniul de cercetare., Sanger s-a retras la vârsta de 65 de ani, pentru a petrece mai mult timp la hobby-uri de grădinărit și plimbare cu barca.