Dolly at 20: the inside story on the world’ s most famous sheep (Svenska)

Dolly, det första däggdjuret klonade från en vuxen cell, föddes 5 juli 1996. Men hon skapades fem månader tidigare, i ett litet rum på Roslin Institute, utanför Edinburgh, Storbritannien.

Karen Walker, embryolog, PPL Therapeutics: den dag Vi gjorde Dolly hade vi en sådan skräp dag.,

Bill Ritchie, embryolog, Roslin Institute: Det var den 8 februari 1996. Jag kollade upp det. Vi vet att det var en skräpdag: vi hade olika problem med infektioner och saker.

Walker: det är synd att byggnaden har rivits, annars kunde du se rummet där Dolly gjordes. Jag använder ordet” rum ” löst, eftersom det verkligen var bara ett stort skåp, som, när Bill och jag var där inne, du kan bara få två stolar och Inkubatorn i.

Ritchie: det var bokstavligen skåpet. Det var förvaringsskåpet i slutet av labbet., När vi fick in kamerabesättningar senare kunde de inte tro det, det fanns inget utrymme att skjuta.

Walker och Ritchie var en del av ett projekt vid Roslin Institute och spin-off PPL Therapeutics, som syftar till att göra exakta genetiska förändringar till husdjur., Det vetenskapliga teamet, ledd av Roslin embryologist Ian Wilmut, motiverade att det bästa sättet att göra dessa förändringar skulle vara att justera genomet hos en cell i kultur och sedan överföra kärnan till en ny cell.

Ritchie: det enkla sättet att beskriva kärnöverföring är att du tar en oocyt, ett obefruktat ägg och du tar bort kromosomerna. Du tar sedan en komplett cell som innehåller både manliga och kvinnliga kromosomer-alla våra celler gör, förutom gonaderna., Du tar den cellen och säkrar den till det enukleerade ägget, aktiverar det-vilket börjar växa-och överför det till en surrogatmamma. Förhoppningsvis, med tummarna, får du en klonad avkomma, en kopia av djuret du har tagit den cellen från.

Walker: tråkig är absolut ordet. Du sitter och tittar ner i ett mikroskop och du har båda händerna på mikromanipulatorerna. Det är ungefär som joysticks barnen använder nuförtiden på spel. Om din armbåge halkade, kan du torka ut hela skålen.,

ett år tidigare hade laget producerat tvillingfår, som heter Megan och Morag, genom att klona odlade embryonala celler i en ansträngning som spearheaded av Roslin utvecklingsbiolog Keith Campbell. Men den här dagen i februari 1996 innebar problem med de fostercellslinjer som de hade planerat att använda att de skulle behöva en annan nukleär givare.

Walker: mitt minne är att flaxa som en kyckling, tänka, ” Vad ska vi lägga in?”eftersom cellerna vi skulle använda inte är där. Det sista du vill göra är att slösa bort de oocyter du har. Vi ville åtminstone prova något.,

Angela Scott, cellkulturtekniker, PPL: jag fick ord från Karen för att säga att cellerna de förväntade sig hade blivit förorenade. De frågade om jag hade några celler som de kunde använda. De celler jag hade var äggbröstepitelceller: vi letade efter att öka uttrycket av proteiner i mjölk. Dessa var vuxna celler.

Alan Colman, forskningschef, PPL: jag hade kommit från en bakgrund av kärnvapenöverföring med John Gurdon . Han har aldrig kunnat få en vuxen groda genom att använda nukleär överföring från en vuxen celldonator., Han hade kunnat få grodyngel med hjälp av vuxna celler, men han hade aldrig kunnat få en vuxen groda. Jag trodde inte att det skulle fungera med vuxna celler alls. Men vi hade ingen annan celllinje att gå med, så vi var alla överens om att vi ” d använder dessa bröstkörtelceller och bara se vad som hände, få lite erfarenhet. Dessa var från en 6-årig får-medelålders för ett får.

Ian Wilmut, embryolog, Roslin: detta är något som har fel till denna dag. Dolly beskrivs som det första däggdjuret klonat från en vuxen cell. Hon är faktiskt den första vuxna klonen, period. Hon är ofta undersåld.,

även om klonade och transgena kor skulle vara mer värdefulla för industrin, arbetade Roslin-teamet med får av praktiska skäl.

Wilmut: nötkreatur är otroligt dyra och har ett långt generationsintervall. Får är mycket billigare och mycket lättare att arbeta med. Och vi kände till reproduktiv biologi. Det var mycket troligt att om vi kunde få något att fungera i får, skulle det fungera i kor. Får är små, billiga kor.

John Bracken, farm research assistant, Roslin: det skulle finnas 40-60 djur som går igenom kirurgi varje vecka under avelssäsongen., Det är många olika får i systemet, och det måste övervakas mycket noggrant så att djuren var på rätt plats vid rätt tidpunkt.

Walker: Bill brukade hålla embryon och oocyter — när han tog dem tillbaka från gården — i sin övre skjortficka. Jag hade inte en top shirt pocket, så jag brukade stoppa dem i min behå. Det var ett sätt att hålla dem varma och hämta dem tillbaka till labbet och få dem till en korrekt kontrollerad miljö. Jag tror inte att inuti min behå var fruktansvärt kontrollerad, men inte heller bills top shirt pocket.,

Ritchie: den dag Vi gjorde Dolly skulle jag ha gjort enukleationen, och hon skulle ha gjort fusionen. Det var vårt normala sätt att göra saker.

Walker: jag gjorde fusionen den dag Vi gjorde Dolly. Bill och jag skämtar, att han är mamma och jag är pappa eftersom jag i huvudsak var efterliknar vad spermierna skulle göra.

de överförde 277 kärnor från bröstcellslinjen — från en vithårig ras som kallas Finn Dorset-till ägg från Hardy Scottish blackface — rasen. Bara 29 av de resulterande embryona implanterades i surrogattackor. Förväntningarna var låga: det verkade nästan omöjligt att en vuxen cellkärna kunde omprogrammeras för att ge upphov till ett levande djur. De flesta klonade embryon avbröts, många även före en graviditet kunde bestämmas med ultraljud.

Wilmut: fåruppfödningssäsongen börjar i oktober och slutar i februari, mars-ish., Vid jul hade vi etablerat graviditeter efter överföring från fosterceller, så det gick bra. Om vi inte hade gjort det hade vi förmodligen inte spelat på att arbeta med det som blev Dolly, bröstcellerna.

Angelika Schnieke, molekylärbiolog, PPL: jag minns att jag träffade Ian Wilmut i matsalen, och han var väldigt skeptisk. Han sa :” jag skulle bli förvånad om det fungerar, men PPL betalar för experimenten, så vi”re gör dem.”

Bracken: vi skannade alla mottagare som hade embryon överförda, och vi visste att de var viktiga får., Varje dag som forskarna visste att vi skannade, skulle de vara mycket angelägna om att veta om det fanns några graviditeter.

Walker: jag gick inte ner för att titta på alla skanningar. Men med Dolly-för att vi visste att det var cells Bill och jag hade lagt in – hade jag gått ner den dagen med John.

Bracken: jag var bara väldigt glad över att det var en graviditet. Jag insåg inte den verkliga betydelsen av det eftersom vi inte fick veta det. Vi visste bara att det var en viktig graviditet. Den hade inte samma vikt. Vi tänkte inte, Wow!, Om detta utvecklas till ett levande Lamm, kommer det att bli en världssätare, eller det kommer att vända vetenskaplig förståelse på huvudet.”

Walker: jag tog en tom video upp med mig, så att jag kunde visa mina kollegor. Den videon sitter uppe i mitt loft, och till min skam har jag aldrig överfört den till DVD. Jag borde.

Schnieke: jag minns dagen då vi hade den första skanningen. Vi frågade alltid. Sen såg vi bilden och skanningarna. Då måste du bara hoppas att det varar och går hela vägen igenom.,

Wilmut: mitt minne är att de tittade runt dag 30 eller 35, så det finns ytterligare 120 dagar, där du fortsätter sucka med lättnad och hoppas.

bara några av lagmedlemmarna fick bevittna hennes födelse.

Bracken: det hände ungefär 4:30 på eftermiddagen. Så snart hon gick in i arbete, ringde vi Dick veterinären för att få en av sina veterinärer att komma ut., Även om Douglas McGavin och jag förmodligen hade 50 års erfarenhet mellan oss, skulle det bara ha varit otänkbart om vi bestämde att vi skulle hjälpa födelsen och något hade gått fel.

Ritchie: vi visste att Dolly skulle födas, och jag tror att hon visade tecken på att komma nära lambing, och se och se, jag gick igenom och det fanns bitar av Dolly som föddes. Det var en veterinär där, så hon såg till att djuret var okej och drog ut lammet.

Bracken: det var helt normalt. Inga komplikationer alls. Hon var ett livskraftigt lamm., Hon kom på fötterna väldigt snabbt, förmodligen inom den första halvtimmen, vilket är en riktigt bra indikation på att saker är normala.

Ritchie: jag tror att jag hoppade upp och ner när jag såg det vita ansiktet.

Scott: Karen var borta vid ett bröllop på den tiden.

Walker: jag hade gett henne faxnumret på hotellet. Jag önskar att jag hade behållit faxet. Det stod: ”hon har ett vitt ansikte och furiga ben.”

Scott: Jag vet inte vad de måste ha tänkt på hotellet: ”Wow, det är en riktigt ovanlig bebis.”

Wilmut: jag var i tilldelningen. Jag hade ett telefonsamtal för att säga att vi hade ett levande lamm., Jag utfärdade en instruktion att ingen skulle vara där som inte behövde vara där. Massor var nyfikna. Jag lydde min egen regel för jag hade inget att bidra med.

Bracken: jag står bredvid Douglas McGavin tittar veterinären hjälpa denna födelse, och jag gjorde en Off-the-cuff anmärkning till Douglas. Jag sa: ”Vet du vad vi måste kalla det här lammet?” Vi ”kommer att behöva kalla det Dolly”, efter Dolly Parton, eftersom cellerna härrör från bröstvävnad.

Wilmut: att vara något puritansk, jag kanske har varit lite orolig. Med efterhand, utan tvekan var det ett bra namn.,

Bracken: detta är hearsay. Jag fick aldrig veta det direkt. Men jag hörde att de hade kontaktat Dolly Parton och sagt: ”Vi har fått ett klonat får som är uppkallat efter dig.”

Wilmut: jag vet inte hur meddelandet kom igenom, men vi fick veta att hennes agent hade sagt: ”det fanns inget sådant som baaad publicitet. Jag vet inte om det är sant.

under de närmaste månaderna bekräftade Wilmut ’ s team att Dolly var en klon av bröstcelllinjen och skrev upp resultaten. Hennes födelse skulle hållas topphemligt, tills Naturpapperet som beskriver experimentet kunde publiceras i februari 1997 (I., Wilmut et al. Natur 385, 810-813; 1997).

Harry Griffin, vetenskaplig regissör, Roslin: två eller tre månader före offentliggörandet av papperet fick jag veta om det. När det gäller förberedelse var PPL inblandade. De såg det som en möjlighet att få publicitet för sig själva. Vi arbetade med deras PR-företag, de Facto. Vi gjorde en hel del förberedelser.,

Wilmut: Ron James, som var verkställande direktör för PPL therapeutics, och jag citerades som de primära talesmännen och fick lite utbildning av ex-BBC-personer, som först och främst kom upp och ganska aggressivt fast mikrofoner upp våra näsor och ställde aggressiva frågor, och därefter gjorde det mycket försiktigt. Vi närmade oss inte någonstans i närheten av det aggressiva sättet de försökte först, vilket var ganska chockerande. Jag är säker på att det var värt att ha.

Griffin: vi hade allt organiserat., Samtalen skulle riktas till de Facto och de skulle försöka organisera en viss samstämmighet i vårt svar när det gäller vem som fick prioritet och vem som gjorde”t. allt detta skulle kulminera, vi hoppades, på torsdagen att papperet kom ut. Vad var det, 27 februari? Klart, det gjorde det inte.

Wilmut: Robin McKie vid observatören läckte det. Han kommer att förneka anklagelsen.

Robin McKie, science and technology editor, The Observer, London: Jag såg inte det i naturen. Jag skyller inte på honom för att han var arg, men jag gick till stora smärtor för att undvika de saker som skulle få mig att bli anklagad för det., Jag hade hjälpt ett par killar som gjorde ett tv-program om genetik, och de sa, ”Åh, förresten, de” har klonat ett får i Edinburgh.”Jag trodde inte på dem, men jag ringde några personer på fältet, och en av dem i Amerika bekräftade det. Men jag var väldigt orolig. Jag sa något ganska sensationellt, med absolut inga papper bevis på något som hade pågått. Jag berättade för min biträdande redaktör allt jag visste, och han fick mig att skriva det. Sen slog skiten ner fläkten.,

Griffin: Ian ringde mig och sa att han ” d just blivit uppringd och berättade att observatören skulle köra historien på söndagen före publicering i naturen.

Ian och jag gick in i institutet vid ca 9 på söndagen, utan att veta om människor kunde komma igenom. Telefonen ringde kontinuerligt. Vi hade en bisarr omständighet där en telefon började ringa i ett rengöringsskåp. När jag svarade på det var det, tror jag, Daily Mirror, som på något sätt hade fått denna speciella anslutning. Halv nio på kvällen åkte vi hem.,

Jim McWhir, stamcellsforskare, Roslin: jag minns att jag kom in dagen efter embargot bröt och det fanns flera satellitbilar i parkeringen.

Wilmut: det fanns tv-lastbilar överallt. Jag pratade på Good Morning America.

Griffin: CBS, NBC, ABC, BBC, alla där vill ha intervjuer med Ian, som vill se fåren. Det var kaos. Jag tror inte att du någonsin kan uppskatta intensiteten i media i full flygning om du inte har upplevt det själv.

McWhir: det var bara pandemonium. Att gå ner till den stora djurenheten var bara en skog av flashlökar och reportrar. Det var helt fantastiskt. Jag vände mig om och gick tillbaka till jobbet.

Griffin: min sekreterare skulle lägga ner telefonen, och det ringde omedelbart. Ett av namnen jag hörde nämnas var Harold Shapiro . Hon sa, ”Ian Wilmut kan inte prata med dig nu, kan du ringa tillbaka senare?,”Bill Clinton hade bett honom att rapportera tillbaka inom 90 dagar om de etiska konsekvenserna av kloning. Jag hörde hans namn och sa: ”nej, vi vill definitivt prata med honom.”

Colman: när du är inbäddad i ett projekt har du vad du anser vara goda vetenskapliga skäl för att göra det. Allt vi gjorde omfattades av en etikkommitté. Vi hade gått igenom en hel del oro för djurs hälsa. Vår oro var mer om den sortens reaktion. Vi gjorde det inte som en förspel till kloning av människor.

Griffin: personer i media tryckte upprepade gånger på denna punkt., Vi anklagades för att ha Dolys födelsehemlighet för att vi övervägde att klona en människa. Vi hade vår ståndpunkt klar: den var oetisk och osäker.

Wilmut: Det går med jobbet. Du måste bara förklara detta är inte fallet.

Schnieke: i Europa sågs det omedelbart som en negativ. ”Vad har de gjort nu och vad kan de göra nästa?”Vi hade polisen på institutet som förklarade vad du gör om det finns en bomb skrämma. Paket undersöktes för sprängämnen.,

Walker: jag minns Ian Wilmut”s personliga assistent, Jackie, få telefonsamtal efter det hela slog pressen. Hon hade många telefonsamtal, några av dem var lite knäppa, från människor som vill ha sina hundar klonade. De sorgligare var de människor som hade förlorat barn eller som hade sjukdomar själva, och detta skulle bli ett genombrott som kunde bota olika sjukdomar.

Colman: Dolly verkade fånga fantasin. Det var ett furigt djur. Att ha ett namn som var identifierbart hjälpte enormt.,

Bracken: om hon”d setts som ett djur som var låst bort, som inte många människor såg, som kunde ha förevigat mer dålig publicitet. Men jag tror, på grund av öppenheten, att människor fick gå och besöka henne och visas runt, detta hjälpte i acceptansen av allmänheten.

Griffin: hon presterade bra för kameran, och alla kunde se att hon var ett helt normalt djur. Eftersom hon var tillgänglig och fotogenisk blev hon det mest kända fåren i världen. Vilken marknadschef som helst skulle ha dödat för det., I några av bilderna är det som om hon intervjuar media.

Walker: jag tog en fotograf ner för att se Dolly. Den här killen producerade en killes festkrona, en liten guldgrej. Jag sa:”Jag tror inte att vi borde.”Vi var alla mycket angelägna om att inte låta Dolly bli humaniserad. Hon var ett får och det var allt.

Bracken: bort från media och kameror försökte vi behandla henne precis som de andra fåren, inte som en slags kändis, som hon uppenbarligen blev.,

Walker: första gången hon klipptes, tog de ullen-som jag har några av, faktiskt-att sticka in i en hoppare för en cystisk fibros välgörenhet. Har du sett henne på museet? Hon ligger bakom ett glashus nu för att folk höll på att klämma bitar av ull från henne. Jag fick i alla fall min ull medan hon fortfarande levde.

Dolly bodde i sex och ett halvt år och födde flera lamm själv. Men 2003 började hon visa tecken på sjukdom.

Bracken: det var Alla hjärtans dag. Jag tror det var en fredag. Vi visste att det fanns potential för denna lungsjukdom att ha utvecklats.,

Griffin: hon led av en sjukdom som heter jaagsiekte. Det är en sjukdom i lungorna och ett eller två andra får i förväg hade gått ner med det.

Wilmut: de tyckte att hon skulle röntgas över på veterinärskolan. De blev förvånade över tumörens storlek i hennes lungor. Vi diskuterade under dessa omständigheter hur svårt vi skulle kämpa för att hon skulle återhämta sig. Vore det inte snällare att bara släppa henne? Så vi avlivade henne. Du ansvarar för djurens välfärd i ditt projekt.,

ett decennium senare slog en annan förlust det vetenskapliga laget med Keith Campbells död.

Colman: Keith var drivkraften. Han var den person som gjorde det viktiga experimentella arbetet som sådde frön av protokollet vi alla använde. Dolly skulle inte ha hänt utan Keith.

Ritchie: Keith var, antar jag, ”ovanligt” är förmodligen det du skulle säga om honom. Han var ganska hippy., Han körde en Volkswagen Beetle, rökt roll-ups, hade långt hår.

Colman: han hade inte ett bra förhållande med Ian. De var väldigt olika personligheter och argumenterade ofta.

Wilmut: jag minns inte rader. Ibland hade vi haft lite olika prioriteringar.

det är alltid mycket svårt att dela upp igenkänningen. Vad som uppenbarligen var orsaken till viss irritation och viss kritik är att han inte fick det första författarskapet på Dolly-papperet. Han fick absolut alla de andra. Det fanns en tid då han sa att Megan och Morag papper var faktiskt viktigare än Dolly., Han var definitivt frustrerad över att jag fick en FRS (Fellow of the Royal Society) och i slutändan en riddare.

Efter en inhemsk tvist tog Campbell livet av sig den 5 oktober 2012.

Colman: Keith var en mycket god vän till mig och vi brukade åka mountainbike i Skottland på kvällarna efter jobbet. Jag pratade med honom tre dagar innan han dog. Jag blev mycket chockad.

Walker: det slog mig mycket hårt, hårdare än jag skulle ha trott. Jag hade inte sett honom på många, många år. Vi var en så nära grupp på den tiden. Vi var tvungna.,

Colman: jag gick till ett möte i Paris i januari, där de hade en posthumous award. De tog en stråkundersökning av hur många människor i publiken som hade hjälpt av vad Keith hade gjort, och ett stort antal människor lade upp sina händer.

de tekniker som utvecklats vid skapandet av Dolly användes för att kopiera värdefulla boskap och göra transgena djur. Men i biomedicinska laboratorier antydde Dolly en framtid där celler kan omprogrammeras till ett embryoliknande tillstånd och användas för att behandla mänskliga sjukdomar.,

Wilmut: födelsen av Dolly vände utvecklingsreglerna upp och ner och gjorde många biologer tänker annorlunda.

Jeanne Loring, stamcellsbiolog, Scripps Research Institute, La Jolla, Kalifornien: det var början på boskapskloning, vilket faktiskt är ganska populärt nu. Det finns ett enormt värde i att kunna förbättra boskap, och detta gav människor ett annat verktyg.

George Seidel, animal reproductive biologist, Colorado State University, Fort Collins: det finns klonade tjurar som producerar sperma som säljs., Det finns en Angus tjur som heter Final Answer, han har en halv miljon avkommor eller något liknande. Så hans klon heter Final Answer II, och du kan köpa hans sperma till hälften av priset. Min fru och jag har en boskapsranch, så vi använder det slutliga svaret II. helvete, det är samma genetik. Men ur teoretisk synvinkel är de transgena sakerna verkligen mycket viktigare än att bara göra kopior. För att göra vår första transgena ko skapade vi tusentals embryon. Det var en enorm ansträngning. En tiondel av pengarna, en tiondel djuren är vad transgenics plus kloning kan göra för dig.,

Robert Lanza, chief scientific officer, Astellas Institute for Regenerative Medicine, Marlborough, Massachusetts: jag var upphetsad. Nu kan vi förhoppningsvis tillämpa samma teknik — inte så mycket för djur och jordbruk — utan för att behandla en lång lista över mänskliga sjukdomar. Vad Dolly visade var den enorma kraften i den tekniken och äggets Magi. Det fanns faktorer i ägget som kunde ta vuxna celler bakåt i tiden och återställa dem till ett embryonalt tillstånd.

Shinya Yamanaka, stamcellsforskare, Kyoto University, Japan: mitt första svar var ” Wow!, Det är som science fiction.”Men det var inte något jag planerade att arbeta med. Att döma av papperet är kloningsprocessen mycket tekniskt utmanande. Nästa år kom det första mänskliga embryonala stamcellspappret ut. Det är när jag omvärderade Dolly. Jag tänkte, åtminstone i teorin, att vi skulle kunna omprogrammera somatiska celler tillbaka till embryonala tillstånd så att vi kan göra ES-liknande stamceller direkt från hud eller blodceller.

McWhir: ett resultat som Dolly stoppar människor i sina spår, och de säger: ”häng på. Om jag har sagt att det är omöjligt, vad mer säger jag är omöjligt?,”

Schnieke: du har några experiment där det tar upp ditt hjärtslag. Dolly var en.

Ritchie: det är ungefär som att ha barn. Jag har ingen själv. Dolly kanske är den sortens barn.

Wilmut: det skulle vara fel att säga mitt namn ”s känd hela vägen runt om i världen — men Dolly”s är.

---