Promega anslutningar
det är med sorg att vi känner igen passagen av Dr.Frederick Sanger. Sanger är känd för molekylärbiologer och biokemister över hela världen för sin DNA-sekvenseringsteknik, som vann 1980 års Nobelpris i kemi.
också anmärkningsvärt uppnådde Sangers laboratorium den första fullständiga genomsekvensen, den av ett viralt DNA-genom mer än 5000 baspar i längd.
1980 års pris var Sangers andra Nobelpris, hans första pris 1958 för bestämning av proteins kemiska struktur., I detta arbete belyste Sanger inte bara aminosyrorna som bestod av insulin utan också den ordning i vilken aminosyrorna inträffade.
om Sanger-sekvensering
Sanger-DNA-sekvensering är också känd som kedjetermineringsmetoden för sekvensering. Sanger-tekniken använder dideoxynucleotider eller ddNTPs förutom typiska deoxynucleotider (dNTPs) i reaktionen. ddNTPs resulterar i uppsägning av DNA-strängen eftersom ddNTPs saknar 3′ – OH-gruppen som krävs för fosfodiesterbindningsbildning mellan nukleotider. Utan detta band avslutas kedjan av nukleotider som bildas.,
Sanger-sekvensering kräver ett enkelsträngat DNA, en DNA-primer (antingen radiomärkt eller med en fluorescerande tagg), DNA-polymeras, dNTPs och ddNTPs. Fyra reaktioner sätts upp, en för varje nukleotid, G, A, T och C. I varje reaktion har alla fyra dntp ingår, men bara en ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP eller ddTTP) läggs till. Sekvenseringsreaktionerna utförs och produkterna denatureras och separeras av storlek med användning av polyakrylamidgelelektrofores.
denna reaktionsblandning resulterar i olika längder av fragment som till exempel representerar platsen för varje en nukleotid i sekvensen, för medan det finns mer dATP än ddATP i reaktionen finns det tillräckligt med ddATP att varje ATP i slutändan istället ersätts med en ddatp, vilket resulterar i kedjeterminering. Separation genom gelelektrofores avslöjar storleken på dessa ddatp-innehållande fragment, och därmed platserna för alla en nukleotid i sekvensen. Liknande information finns för GTP, CTP och TTP.,
Maxam och Gilbert DNA-sekvenseringsmetoden hade fördelen vid den tidpunkt då den användes med dubbelsträngat DNA. Denna metod krävde emellertid DNA-strängseparation eller fraktionering av restriktionsenzymfragmenten, vilket resulterade i en något mer tidskrävande teknik jämfört med 1977-metoden publicerad av Sanger et al.
dr. Sanger föddes i Gloucestershire, Storbritannien 1918, son till en läkare. Även om han ursprungligen planerade att följa sin far till medicin, blev biokemi hans livslånga passion och forskningsområde., Sanger gick i pension vid 65 års ålder, att spendera mer tid på hobbyer av trädgårdsarbete och båtliv.