Was ist DNA-Sequenzierung der nächsten Generation?

Im Gegensatz zu Mikroarrayverfahren bestimmen sequenzbasierte Ansätze direkt die Nukleinsäuresequenz eines gegebenen DNA – oder cDNA-Moleküls.

Der erste große Vorstoß in die DNA-Sequenzierung war das Human Genome Project. Dieses Projekt, bei dem die Sequenzierung der ersten Generation, die als Sanger-Sequenzierung (die Kettenbeendigungsmethode) bekannt ist, verwendet wurde, dauerte 13 Jahre, kostete 3 Milliarden US-Dollar und wurde 2003 abgeschlossen.,

Im Vergleich zur herkömmlichen Sanger-Sequenzierung unter Verwendung der Kapillarelektrophorese ist die kurzgelesene, massiv parallele Sequenzierungstechnik ein grundlegend anderer Ansatz, der die Sequenzierungsfähigkeiten revolutionierte und die Sequenzierungsmethoden der zweiten Generation-oder Next – Generation Sequencing (NGS)-auf den Markt brachte, die um Größenordnungen mehr Daten zu viel geringeren wiederkehrenden Kosten liefern.

Next-Generation Sequencing (NGS), auch als High-Throughput Sequencing bekannt, ist der Catch-all-Begriff verwendet, um eine Reihe von verschiedenen modernen Sequenzierungstechnologien zu beschreiben., Diese Technologien ermöglichen die Sequenzierung von DNA und RNA viel schneller und kostengünstiger als die bisher verwendete Sanger-Sequenzierung und revolutionierten als solche das Studium der Genomik und Molekularbiologie. Solche Technologien umfassen:

Vorteile von NGS

NGS kann zur Analyse von DNA-und RNA-Proben verwendet werden und ist ein beliebtes Werkzeug in der funktionellen Genomik.,>höherer Dynamikbereich des Signals

erfordert weniger DNA/RNA als Eingabe (Nanogramme von Materialien sind ausreichend)

höhere Reproduzierbarkeit

NGS technologies

• Illumina (Solexa) Sequenzierung: Die Illumina-Sequenzierung funktioniert, indem DNA-Basen gleichzeitig identifiziert werden, da jede Base ein einzigartiges fluoreszierendes Signal aussendet und sie einer Nukleinsäurekette hinzufügt

Roche 454 Sequenzierung: Diese Methode ist basierend auf Pyrosequenzierung, eine Technik, die Pyrophosphatfreisetzung detektiert, wieder unter Verwendung von Fluoreszenz, nachdem Nukleotide durch Polymerase in einen neuen DNA-Strang eingebaut wurden.,

• Ion Torrent: Proton / PGM sequencing: Ion Torrent Sequencing misst die direkte Freisetzung von H+ (Protonen) aus dem Einbau einzelner Basen durch DNA-Polymerase und unterscheidet sich daher von den beiden vorherigen Methoden, da es kein Licht misst.

Auf den nächsten Seiten wird Schritt für Schritt erklärt, wie jede dieser NGS-Technologien funktioniert.,

Diese Youtube – Videos geben einen nützlichen Überblick darüber, wie Sanger Sequencing und die verschiedenen Next Generation Sequencing-Technologien funktionieren und wann sie verwendet werden:

Next Generation Sequencing (NGS) – Eine Einführung
Wann verwende ich Sanger Sequencing vs. NGS? – Seq Es aus #7

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