Che cos’è il sequenziamento del DNA di nuova generazione?
In contrasto con i metodi microarray, gli approcci basati sulla sequenza determinano direttamente la sequenza di acido nucleico di una data molecola di DNA o cDNA.
La prima grande incursione nel sequenziamento del DNA è stato il progetto Genoma umano. Questo progetto, che ha utilizzato il sequenziamento di prima generazione, noto come Sanger sequencing (il metodo di terminazione a catena), ha richiesto 13 anni, è costato $3 miliardi ed è stato completato nel 2003.,
Rispetto al sequenziamento Sanger convenzionale mediante elettroforesi capillare, la tecnica di sequenziamento massivamente parallelo a lettura breve è un approccio fondamentalmente diverso che ha rivoluzionato le capacità di sequenziamento e lanciato i metodi di sequenziamento di seconda generazione-o next – Generation sequencing (NGS)-che forniscono ordini di grandezza più dati a costi ricorrenti molto più bassi.
Next-Generation sequencing (NGS), noto anche come high-throughput sequencing, è il termine catch-all usato per descrivere una serie di diverse tecnologie di sequenziamento moderne., Queste tecnologie consentono il sequenziamento del DNA e dell’RNA in modo molto più rapido ed economico rispetto al sequenziamento Sanger precedentemente utilizzato, e come tale hanno rivoluzionato lo studio della genomica e della biologia molecolare. Tali tecnologie includono:
Vantaggi di NGS
NGS può essere utilizzato per analizzare campioni di DNA e RNA ed è uno strumento popolare nella genomica funzionale.,>maggiore gamma dinamica del segnale
NGS tecnologie
- Illumina (Solexa) sequenziamento: sequenziamento Illumina opere contemporaneamente individuazione di basi del DNA, come ogni base emette un unico segnale fluorescente, il loro inserimento in una catena di acido nucleico
- Roche 454 sequenziamento: Questo metodo si basa su pyrosequencing, una tecnica che rileva pirofosfato di rilascio, utilizzando la fluorescenza, dopo nucleotidi sono incorporati mediante polymerase di un nuovo filamento di DNA.,
- Ion Torrent: Proton / PGM sequencing: Ion Torrent sequencing misura il rilascio diretto di H+ (protoni) dall’incorporazione di singole basi da parte della DNA polimerasi e quindi differisce dai due metodi precedenti in quanto non misura la luce.
Le prossime pagine forniscono spiegazioni dettagliate su come funzionano ciascuna di queste tecnologie NGS.,
Questi video di Youtube danno una panoramica utile di come Sanger sequencing e le diverse tecnologie di sequenziamento di prossima generazione funzionano e quando usarli:
Next Generation Sequencing (NGS) – Un’introduzione
Quando uso Sanger Sequencing vs. NGS? – Seq Fuori # 7