What is Next Generation DNA Sequencing?
em contraste com os métodos de microarray, abordagens baseadas em sequências determinam diretamente a sequência de ácido nucleico de uma dada molécula de DNA ou cDNA.
A primeira grande incursão na sequenciação do DNA foi o Projeto Genoma Humano. Este projeto, que usou sequenciamento de primeira geração, conhecido como sequenciamento Sanger (o método de terminação de cadeia), levou 13 anos, custou US $3 bilhões e foi concluído em 2003.,
em comparação com a sequenciação convencional de Sanger usando eletroforese capilar, a técnica de sequenciação paralela de Leitura curta, massivamente é uma abordagem fundamentalmente diferente que revolucionou as capacidades de sequenciação e lançou os métodos de sequenciação de segunda geração-ou sequenciação de próxima geração (NGS) – que fornecem ordens de magnitude mais dados a um custo recorrente muito menor.
sequenciamento de próxima geração( NGS), também conhecido como sequenciamento de alto rendimento, é o termo usado para descrever uma série de diferentes tecnologias modernas de sequenciamento., Estas tecnologias permitem a sequenciação de DNA e RNA muito mais rápida e barata do que a sequenciação de Sanger usada anteriormente, e como tal revolucionou o estudo de genômica e biologia molecular. Tais tecnologias incluem:
vantagens de NGS
NGS pode ser usado para analisar amostras de DNA e RNA e é uma ferramenta popular em genômica funcional.,>maior gama dinâmica do sinal
NGS tecnologias
- Illumina (Solexa) seqüenciamento: Illumina sequenciamento de obras, simultaneamente, a identificação de bases de DNA, como cada base emite um único sinal fluorescente, e adicioná-los a um ácido nucleico cadeia
- Roche 454 seqüenciamento: Este método é baseado no pyrosequencing, uma técnica que detecta pirofosfato de lançamento, novamente usando fluorescência, depois de nucleotídeos são incorporados pela polimerase para uma nova fita de DNA.,torrente de íons: sequenciamento de prótons / PGM: a sequenciação de torrente de íons mede a libertação direta de H+ (prótons) da incorporação de bases individuais pela DNA polimerase e, portanto, difere dos dois métodos anteriores, uma vez que não mede a luz.
as páginas seguintes fornecem explicações passo a passo de como cada uma destas tecnologias NGS funcionam.,
estes vídeos do Youtube dão uma visão útil de como a sequenciação de Sanger e as diferentes tecnologias de sequenciamento de próxima geração funcionam e quando usá – los:
sequenciação de próxima geração (NGS) – uma introdução
Quando eu uso sequenciação de Sanger vs. NGS? – Seq It Out # 7