Promega Connections
Het is met droefheid dat we het overlijden van Dr. Frederick Sanger herkennen. Sanger is wereldwijd bekend bij moleculaire biologen en biochemici voor zijn DNA sequencing techniek, die voor hem de Nobelprijs voor de Scheikunde in 1980 won.
ook opmerkelijk, sanger ‘ s laboratorium volbracht de eerste volledige genoomsequentie, die van een viraal DNA genoom meer dan 5.000 basenparen in lengte.de prijs van 1980 was Sanger ‘ s tweede Nobelprijs, zijn eerste prijs in 1958 voor het bepalen van de chemische structuur van eiwitten., In dit werk, verduidelijkte Sanger niet alleen de aminozuren die insuline omvatten maar ook de orde waarin de aminozuren voorkwamen.
Over Sanger Sequencing
sanger DNA sequencing is ook bekend als de chain-termination methode van sequencing. De sanger techniek gebruikt dideoxynucleotides of ddNTPs naast typische deoxynucleotides (dNTPs) in de reactie. ddntps resulteert in beëindiging van de bundel van DNA omdat ddntps de 3′-OH groep ontbreekt die voor phosphodiesterbandvorming tussen nucleotiden wordt vereist. Zonder deze band, wordt de keten van nucleotiden gevormd beëindigd.,het rangschikken van
sanger vereist een single-stranded DNA, een DNA-primer (of radioactief gelabeld of met een fluorescente markering), de polymerase van DNA, dNTPs en ddNTPs. Vier reacties worden opgezet, één voor elk nucleotide, G, A, T en C. In elke reactie zijn alle vier dNTPs opgenomen, maar slechts één ddNTP (ddATP, ddCTP, ddGTP of ddTTP) wordt toegevoegd. De het rangschikken reacties worden uitgevoerd en de producten gedenatureerd en gescheiden door Grootte gebruikend de elektroforese van het polyacrylamidegel.
Deze reactiemix resulteert in verschillende lengtes van fragmenten die bijvoorbeeld de locatie van elk nucleotide in de sequentie weergeven, want hoewel er meer datP dan ddATP in de reactie zit, is er genoeg ddATP dat elke ATP uiteindelijk vervangen wordt door een ddatp, wat resulteert in ketenbeëindiging. De scheiding door gelelektroforese onthult de grootte van deze ddatp-bevattende fragmenten, en zo de plaatsen van al nucleotide in de opeenvolging. Soortgelijke informatie wordt verstrekt voor GTP, CTP en TTP.,
De Maxam en Gilbert DNA sequencing methode had het voordeel op het moment van gebruik met dubbelstrengs DNA. Nochtans, vereiste deze methode de bundelscheiding of de fractionering van DNA van de fragmenten van het beperkingsenzym, resulterend in een iets meer tijdrovende techniek, in vergelijking met de methode van 1977 die door sanger et al wordt gepubliceerd.Dr. Sanger werd geboren in Gloucestershire, Verenigd Koninkrijk in 1918 als zoon van een arts. Hoewel hij aanvankelijk van plan was om zijn vader in de geneeskunde te volgen, werd de biochemie zijn levenslange passie en onderzoeksgebied., Sanger ging op 65-jarige leeftijd met pensioen, om meer tijd door te brengen bij hobby ‘ s van tuinieren en varen.